Utama // Leukemia

DAC menguji apa itu

Sifilis adalah penyakit kelamin berjangkit yang disebabkan oleh spirochetes treponema pucat. Jalan penularan: semasa hubungan seks, dari ibu ke janin, transfusi, dan lebih jarang - melalui luka pada kulit yang bersentuhan dengan lesi berjangkit. Bergantung pada tahap, sifilis primer, sekunder, laten dan tersier diasingkan.

Cara langsung

Mikroskopi Medan Gelap

Treponema pucat tidak dapat tumbuh di media kultur dan tidak dapat dilihat dalam mikroskop cahaya. Oleh kerana pengesanan patogen menggunakan mikroskop konvensional tidak mungkin, mikroskop khas dengan medan gelap digunakan, di mana patogen dapat dilihat sebagai lingkaran pada latar belakang gelap.

Untuk mikroskopi, biomaterial diambil dari lesi yang disyaki penyakit. Mikroskopi medan gelap adalah cara yang mungkin untuk menilai lesi kulit, seperti kemungkinan sifilis primer atau kondiloma sifilis sekunder. Sekiranya bahan fokus makulopapular kering, periksa aspirasi kelenjar getah bening.

Hasil negatif tidak mengecualikan proses patologi, secara statistik pengenalpastian patogen hanya mungkin pada 80%.

Diagnostik PCR

Reaksi yang bertujuan untuk peningkatan DNA dalam treponema pucat memungkinkan kita menyimpulkan bahawa jangkitan sifilis atau ketiadaannya.

Biomaterial untuk analisis boleh berupa: darah, kandungan sifilida, cecair serebrospinal, dan lain-lain. Ujian ini sesuai untuk tempoh inkubasi..

PCR adalah khusus.

Ujian serologi tidak langsung untuk sifilis: ujian treponemal dan nontreponemal

Ujian serologi (DAC atau kompleks reaksi serologi) dianggap sebagai kaedah yang paling biasa untuk mendiagnosis semua peringkat sifilis. Reaksi berikut dibezakan:

• aglutinasi;
• pemendakan;
• imunofluoresensi;
• immunoassay enzim.

Juga, ujian serologi untuk sifilis dibahagikan kepada treponemal dan nontreponemal.

Nontreponemal

Sekiranya disyaki mendapat sifilis, ujian saringan dilakukan, yang mana ujian non-treponemal digunakan yang menentukan antibodi terhadap antigen lipoid tisu inang atau patogen dalam pelbagai modifikasi. Di Persekutuan Rusia, reaksi mikroprecipitasi (RMP) dilakukan secara rutin, yang memungkinkan pengesanan antibodi terhadap sel darah yang rosak oleh patogen. Kebolehpercayaan penyaringan adalah tinggi, tetapi kekhususannya kecil, jadi pengujian sesuai untuk pemeriksaan massa awal untuk tujuan pencegahan.

Sensitiviti ujian cepat dianggarkan 78-86% untuk pengesanan sifilis primer, 100% untuk sifilis sekunder dan 95-98% untuk pengesanan sifilis tersier.

Kekhususan - dari 85-99%, kadang-kadang kurang, yang berlaku dalam keadaan berikut:

• kehamilan;
• haid;
• onkologi;
• penyakit tisu penghubung;
• batuk kering;
• malaria;
• penyakit virus;
• penyakit hati
• vaksinasi;
• IM "Segar";
• kepialu, dll..

Selain itu, kelebihan lemak dalam diet, minum alkohol, dan mengambil ubat tertentu boleh menyebabkan kesimpulan positif palsu..

Hasil ujian saringan menjadi positif 1-2 minggu selepas pembentukan chancre. Ujian nontreponemal memberikan jawapan negatif beberapa ketika selepas rawatan. Dengan status HIV, antibodi bukan treponemal dapat dikesan untuk waktu yang lama, kadang-kadang sepanjang hayat (seperti yang dibuktikan oleh hasil percubaan rawak yang sesuai).

Jenis ujian nontreponemal lain: VDRL, ujian plasmagin (RPR), ujian merah toluidin, melengkapkan reaksi pengikatan dengan antigen kardiolipin (RSCc).

Reaksi Wasserman (RW)

Pengikatan pelengkap adalah tindak balas sistem kekebalan tubuh terhadap jangkitan, hasilnya bervariasi dari negatif (masukkan "-") hingga positif "++++" atau 4 plus.

Pada peringkat awal sifilis primer, RW adalah negatif.

Treponemal

Oleh kerana kemungkinan keputusan positif palsu, ujian treponemal digunakan untuk mengesahkan hasil positif atau keraguan dari analisis nontreponemal:

• tindak balas imunofluoresensi (RIF);
• hemaglutinasi (RPHA),
• enzim immunoassay (ELISA) untuk kelas G immunoglobulin (IgG) dan immunoglobulin M (IgM);
• imunoblotting;
• RIBT / RIT (reaksi imobilisasi treponemas pucat).

Ujian treponemal tidak digunakan untuk menilai keberkesanan terapi.

RIF untuk penentuan antibodi treponemal dari kelas IgG digunakan setelah hasil positif analisis cepat (kepekaan 84% untuk sifilis primer dan 100% pada tahap lain, kekhususan 96%). Untuk diagnosis sifilis kongenital pada bayi baru lahir tidak berlaku.

Sebilangan makmal menggunakan ujian saringan terbalik..

CDC (Centers for Disease Control and Prevention, USA) mengesyorkan kajian tradisional, disahkan oleh ujian bukan treponemal kuantitatif, dengan hasil positif, rawatan dijalankan.

Reaksi Imunofluoresensi (RIF)

Serum dengan antibodi berlabel fluorokrom khusus untuk antigen treponema pucat digunakan pada bahan yang dikumpulkan, patogen menarik kompleks imun untuk dirinya sendiri, itulah sebabnya ia mula bersinar dalam mikroskop bercahaya.

Reaksi hemaglutinasi pasif atau RPHA

Sekurang-kurangnya 4 minggu mesti berlalu sebelum kemunculan hemagglutination (gluing) sel darah merah dari saat pengenalan treponema pucat.

Sel darah merah yang disiapkan dengan pecahan protein patogen patogen berinteraksi dengan plasma, jika terdapat antibodi terhadap sifilis, reaksi berlaku.

Sesuai untuk mengesahkan sebarang peringkat penyakit..

Ujian imunosorben berkait

Reaksi antigen-antibodi adalah asasnya. Antibodi dari pelbagai kelas dikenal pasti dapat diukur..

Hasil yang diperoleh membolehkan kita menilai jangka masa proses patologi, kejayaan rawatan, status imunologi, aktiviti patogen.

Immunoblotting - sejenis ELISA, digunakan untuk diagnosis mendalam untuk semua hasil yang meragukan.

Sensitiviti dan kekhususan hampir 100%, kini merupakan kaedah yang sangat sensitif untuk mengenal pasti protein.

Kaedah ini berdasarkan reaksi antigen-antibodi. Treponema pucat yang dibiakkan dalam testis arnab berfungsi sebagai antigen. Semasa berinteraksi dengan antibodi orang yang dijangkiti, patogen kehilangan mobiliti mereka. Tindak balas dinilai menggunakan mikroskopi medan gelap..

RIBT saat ini lebih jarang digunakan kerana kerumitan, tetapi analisis dapat berguna untuk menyelesaikan masalah yang diperdebatkan (reaksi positif palsu terhadap sifilis).

Diagnosis pembezaan

Kesukaran terbesar adalah diagnosis sifilis tersier, yang disebabkan oleh gejala dari sistem kardiovaskular dan saraf, serta manifestasi dari kulit.

Kami menyenaraikan penyakit di mana diagnosis pembezaan dilakukan untuk sifilis:

Di manakah bermulanya diagnosis sifilis

Pada mulanya, perbualan dilakukan dengan pesakit, di mana perinciannya dijelaskan: bilakah terdapat hubungan seksual yang mencurigakan dan apa aduannya.

Setelah mengumpulkan anamnesis, mereka menjalani pemeriksaan fizikal, perhatian khusus diberikan kepada kawasan genital dan dubur, membran mukus dan kelenjar getah bening. Diagnosis awal sudah boleh dibuat. Pengesahan akhir dilakukan menggunakan ujian makmal..

Sekiranya kita mengatakan sesuatu yang rumit, beberapa ujian mendedahkan agen penyebab sifilis, sementara yang lain mencerminkan reaksi badan terhadap pengenalan treponema pucat.

Untuk menetapkan diagnosis pasti RPHA, tambah dengan 1 treponemal dan 1 analisis non-treponemal.

Diagnosis sifilis pada wanita hamil

Ujian wajib untuk sifilis dilakukan beberapa kali semasa kehamilan..

Rujukan untuk analisis CSF dikeluarkan semasa lawatan pertama wanita ke konsultasi, dan selama kehamilan dia diperiksa tiga kali. Pesakit dari kumpulan berisiko tinggi dengan sejarah yang membebankan: IMS, asosial, bergantung, dll memerlukan perhatian khusus.

Sekiranya hasil analisisnya positif, lakukan diagnosis yang lebih mendalam, dan menurut indikasi, rawatan ditetapkan, yang bergantung pada tahap dan manifestasi klinikal.

Diagnosis sifilis kongenital

Kebanyakan kanak-kanak dengan sifilis kongenital dilahirkan oleh ibu yang tidak dirawat, atau yang terlambat menerima terapi..

Ujian treponemal serum neonatal tidak digalakkan kerana pemindahan antibodi IgG secara pasif. Semua bayi yang dilahirkan oleh ibu dengan sifilis harus diperiksa menggunakan ujian serologi bukan treponemal kuantitatif (RPR atau VDRL) yang dilakukan menggunakan serum darah bayi yang baru lahir..

Cara mentafsirkan hasil kajian serologi

Tindak balas mikropendapan, RIF dan RPHA adalah negatif - normal, positif - pengesahan sifilis.

Reaksi mikropresipitasi negatif, selebihnya positif - riwayat sifilis setelah terapi tertentu, atau tahap akhir.

RIF negatif dengan reaksi positif RPHA dan mikroprekitasi - hasilnya diragukan, penilaian komprehensif berulang.

Hasil negatif RIF dan mikroprecipitasi, tetapi RPHA positif adalah keadaan setelah terapi antibiotik berjaya atau positif palsu.

RIF positif dengan reaksi negatif RPHA dan mikroprecipitasi - peringkat awal, rawatan atau hasil yang tidak boleh dipercayai.

Tindak balas mikroprecipitasi positif, tidak disahkan oleh RPHA atau RIF - ketiadaan sifilis.

Penyelidikan instrumental untuk sifilis

Diagnostik instrumental dijalankan bergantung pada penglibatan organ. Sebagai contoh, kerosakan hati granulomatosa dapat dilihat dengan tomografi yang dikira pada rongga perut.

X-ray dada pada pesakit dengan sifilis tersier boleh menunjukkan pelebaran aorta. Kalsifikasi linear di sepanjang aorta menunjukkan aortitis sifilik.

Angiografi mungkin berguna dalam diagnosis aneurisme syphilitic perut..

Semasa mendiagnosis neurosifilis dengan gejala yang sesuai, tusukan lumbal dengan pengambilan cecair serebrospinal digunakan..

Misha Victoria, pakar urologi, pemerhati perubatan

19,421 jumlah paparan, 8 paparan hari ini

DAC menguji apa itu

Ujian treponemal untuk sifilis. Deskripsi umum.

Ciri-ciri umum ujian treponemal

Ujian treponemal untuk sifilis. Jenis reaksi serologi.

RSCT - Reaksi pengikat pelengkap dengan antigen treponemal (reaksi Wasserman)

1. Penerangan umum

2. Prinsip ujian

3. Rumusan tindak balas Wassermann dengan antigen treponemal dan cardiolipin

4. Analisis keuntungan

5. Kekhususan dan kepekaan

6. Pada peringkat penyakit apa yang lebih baik digunakan

7. Hasil negatif positif dan palsu

8. Pengubahsuaian reaksi Wassermann

9. Skop

Kompleks reaksi serologi klasik (DAC)

Kelebihan DAC:

Kekurangan DAC:

1. Sejarah kaedah RIBT

2. Prinsip kaedah RIBT

3. Menyiapkan ujian RIBT

4. Rakaman hasil RIBT

5. Pada tempoh penyakit apa yang lebih baik digunakan

8. Punca dan penyebab kesilapan dalam rumusan, hasil positif palsu dan negatif palsu

9. Pengubahsuaian reaksi imobilisasi treponemas pucat

10. Ciri, kelebihan dan kekurangan RIBT

RIF (Reaksi Imunofluoresensi)

1. Sejarah kaedah

2. Prinsip kaedah

4. Analisis keuntungan

5. Pada tempoh penyakit apa yang lebih baik digunakan

7. Skop kaedah

8. Punca dan penyebab kesilapan dalam rumusan, hasil positif palsu dan negatif palsu

9. Ciri, kelebihan dan kekurangan

10. Pengubahsuaian kaedah

Reaksi RPHA dari hemagglutination pasif

1. Sejarah kaedah RPGA

2. Prinsip kaedah RPGA

4. Dengan mengambil kira hasil reaksi hemaglutinasi pasif

5. Pada tempoh penyakit apa lebih baik menggunakan RPHA

6. Kepekaan dan kekhususan RPHA

7. Skop kaedah RPGA

8. Ciri, kelebihan dan kekurangan RPGA

10. Pengubahsuaian kaedah RPGA

IFA - Ujian imunosorben berkaitan enzim

1. Sejarah ELISA

2. Prinsip kaedah ELISA

3. Kaedah menjalankan penyelidikan

4. Analisis keuntungan

5. Pada tempoh penyakit apa yang lebih baik digunakan

6. Kepekaan dan kekhususan

7. Skop kaedah

8. Punca dan penyebab kesilapan dalam rumusan, hasil positif palsu dan negatif palsu

9. Ciri, kelebihan dan kekurangan

10. Pengubahsuaian kaedah

IHA (analisis immunochemiluminescence), IHL (immunochemiluminescence)

Imunoblotting (Western Blot)

1. Sejarah kaedah

2. Imunoblot klasik

3. Immunoblot dalam format immunoassay linear

4. Analisis keuntungan

5. Pada tempoh penyakit apa yang lebih baik digunakan

6. Kepekaan dan kekhususan

7. Skop kaedah

8. Punca dan penyebab kesilapan dalam rumusan, hasil positif palsu dan negatif palsu

9. Ciri, kelebihan dan kekurangan

10. Pengubahsuaian kaedah

teknologi xMAP

Diagnosis sifilis berdasarkan data klinikal dan makmal. Antara yang terakhir, kajian serologi sangat berharga, yang dilakukan tidak hanya untuk mengesahkan diagnosis sifilis, tetapi juga untuk memantau dinamika di bawah pengaruh terapi yang sedang berlangsung.

Serologi sifilis hari ini adalah bidang pengetahuan yang terpisah. Pelbagai reaksi telah dibuat yang mendapat pengiktirafan negara di pelbagai negara. Adalah penting bahawa hasilnya ditafsirkan dengan betul, yang hanya dapat dicapai dengan pengetahuan mengenai asas-asas serologi.

Di negara kita untuk diagnosis serologi sifilis sesuai dengan panduan Kementerian Kesihatan berlaku:

- mikraksi tindak balas pemendakan (MR) dengan antigen kardiolipin - ujian saringan semasa pemeriksaan populasi sifilis;

- Reagin Plasma Test (RPR) juga, walaupun bukan treponemal, digunakan sebagai ujian saringan;

- kompleks reaksi serologi (DAC), yang merangkumi reaksi pengikat pelengkap (DSC) dengan antigen treponemal dan cardiolipin dan MR;

- reaksi imobilisasi treponema pucat (RIBT), di mana treponema pucat patogen strain Nichols digunakan sebagai antigen;

- reaksi imunofluoresensi (RIF) (dalam pengubahsuaian: RIF-abs, RIF-c dan RIF dengan darah kapilari dari jari); treponema pucat patogen dari strain Nichols digunakan sebagai antigen dalam RIF;

- reaksi hemaglutinasi pasif (RPHA) dengan antigen dari treponemas pucat kultur atau patogen;

Ujian imunosorben berkait enzim (ELISA) dengan antigen dari treponema pucat kultur atau patogen.

Semua reaksi ini mempunyai kepekaan dan kekhususan yang berbeza dan disyorkan untuk digunakan bergantung pada tugasnya.

Dalam pemeriksaan profilaksis massa populasi untuk sifilis, MR dengan plasma darah atau serum darah subjek yang tidak aktif digunakan. Hasil tindak balas dinilai.-

kualitatif sebagai 4+, 3+, 2+ dan negatif. Kelebihan kaedah ekspresi adalah kepantasan tindak balas (setelah 30-40 minit), sejumlah kecil darah yang diperlukan untuk analisis (2-3 tetes), yang dapat diambil dari pesakit dari jari.

Dengan menggunakan kaedah ekspres ini, orang yang menjalani pemeriksaan perubatan berkala untuk penyakit kelamin, pesakit dengan hospital somatik, dan orang yang ditempatkan di kemudahan tahanan khas diperiksa. Sekiranya kaedah ekspres digunakan secara terpisah, itu hanya ujian saringan. Berdasarkan hasil positifnya, sifilis tidak didiagnosis, dan subjek dirujuk kepada pakar dermatovenerologi untuk pemeriksaan klinikal dan pemeriksaan darah mereka dengan menggunakan ujian diagnostik lain (CSF, RIBT, RPGA, ELISA atau RIF). Kaedah ekspres tidak digunakan pada wanita hamil, penderma kerana kenyataannya sering memberikan hasil positif palsu. Paramedik khusus mengambil darah dari jari dan melakukan MR. Doktor makmal mesti mengambil kira hasilnya.

CSC dengan antigen treponemal dan cardiolipin digunakan untuk mengesahkan diagnosis sifilis dengan adanya manifestasi aktif penyakit ini, untuk memeriksa orang yang melakukan hubungan seks dengan pesakit dengan sifilis, untuk mengenal pasti sifilis laten (laten), keberkesanan terapi, ketika memeriksa pesakit di hospital psikiatri dan neurologi, penderma dan wanita hamil, termasuk yang dihantar untuk penamatan kehamilan secara buatan.

Darah untuk pemeriksaan diambil dalam jumlah 5-7 ml dari urat ulnar dengan jarum steril, tertakluk pada peraturan aseptik. Pada bayi, darah dapat diperoleh dari urat temporal atau dari sayatan pada tumit. Darah diambil dengan ketat semasa perut kosong (5-6 jam selepas makan) dan dibiarkan dalam tiub kering dan kering selama 2-3 jam pada suhu bilik untuk pembekuan. DAC dan reaksi khusus dilakukan di makmal serologi institusi kulit dan venereologi, dan di kawasan luar bandar - di makmal hospital daerah luar bandar.

Untuk menghantar darah untuk penyelidikan ke makmal terpencil, kaedah titisan kering sangat mudah. Untuk ini, keesokan harinya setelah pengambilan sampel darah, serum dipisahkan dari gumpalan. Pipet lulus menarik 1 ml serum dan menuangkannya dalam bentuk dua bulatan yang berasingan ke jalur kertas tebal (berlilin atau selofan) berukuran kira-kira 6 × 8 cm. Nama, nama dan patronimik pesakit, tarikh pengambilan darah dan nombor siri ditulis di tepi kertas bebas. Serum di atas kertas, terlindung dari sinar matahari dan habuk langsung, dibiarkan

selama 24 jam pada suhu bilik untuk pengeringan. Selepas itu, sehelai kertas dengan whey kering digulung dan dihantar ke makmal.

RSK dalam DAC dengan antigen kardiolipin tidak terlalu sensitif dan menjadi positif setelah 2-4 minggu selepas kemunculan chancre padat, dan titer reagen secara beransur-ansur meningkat dan mencapai maksimum (1: 160-1: 320 dan lebih tinggi) dengan sifilis segar sekunder. Kemudian titer reagen secara beransur-ansur berkurang dan dengan sifilis berulang sekunder biasanya tidak melebihi 1: 80-1: 20. Pada pesakit dengan sifilis tersier, reaksi ini memberikan hasil positif hanya pada 70% kes.

Perlu ditekankan bahawa DAC tidak khusus untuk sifilis dan dalam beberapa kes dapat memberikan hasil positif palsu (tidak spesifik). Reaksi positif palsu seperti ini diperhatikan pada pesakit kusta, malaria, kadang-kadang dengan penyakit autoimun, neoplasma, radang paru-paru, tuberkulosis, penyakit hati, semasa mengambil ubat (sulfonamides, glukosida, valerian, dll.), Serta semasa kehamilan, semasa haid, dll. d. Semasa mengambil darah untuk penyelidikan mengenai DAC, perlu memberi amaran kepada subjek agar dia tidak minum alkohol, makanan berlemak, atau minum ubat 2-3 hari sebelumnya. Tidak disyorkan untuk menguji darah selama 1 minggu setelah vaksinasi, kecederaan, campur tangan pembedahan, dengan demam, selama 2 minggu pertama setelah kelahiran, pada bayi baru lahir dalam 10 hari pertama kehidupan, kerana perubahan fisiko-kimia dalam serum darah dalam keadaan ini boleh sama dengan yang diperhatikan pada pesakit sifilis.

Hasil positif yang salah juga dapat diperoleh kerana kesalahan teknikal (hemolisis yang tidak lengkap, pengumpulan darah tidak steril, kelayakan pembantu makmal yang tidak mencukupi).

Untuk membezakan hasil positif-positif DAC dari yang benar, untuk mendiagnosis bentuk sifilis laten dan terlambat, dalam kes-kes yang disyaki jangkitan sifilik, untuk membuat diagnosis retrospektif penyakit, disarankan untuk menggunakan reaksi serologi tertentu (RIBT, RPGA, ELISA atau RIF)

Untuk reaksi serologi tertentu, darah dalam jumlah 5-10 ml juga diambil dari urat ulnar pada perut kosong. Darah dituangkan ke dalam tiub kering untuk diuji pada RIF dan di dalam tabung steril untuk diuji pada RIBT. Perumusan reaksi serologi spesifik terhadap sifilis dilakukan di makmal khusus institusi kulit dan venereologi.

RIF berdasarkan kaedah tidak langsung untuk menentukan antibodi pendarfluor. Antigen dalam reaksi ini adalah penggantungan treponem pucat budaya yang terbunuh, terpaku pada slaid kaca, di mana ujian dan serum pendarfluor anti-spesies digunakan. Hasil RIF ditentukan di bawah mikroskop bercahaya dengan menilai cahaya treponem dalam penyediaannya. Dengan hasil positif, treponema mempunyai cahaya hijau kekuningan, tahap yang ditunjukkan dengan tanda tambah dari 1 hingga 4; dengan hasil negatif, treponema tidak bercahaya.

Reaksi khusus lain terhadap sifilis - RIBT - didasarkan pada fenomena imobilisasi treponemas pucat dengan antigen serum darah pesakit dengan adanya pelengkap. Sebagai antigen untuk RIBT, suspensi treponemas pucat hidup yang diperoleh dari arnab yang dijangkiti sifilis digunakan. Pengiraan treponemas mobiliti hilang (tidak bergerak) dilakukan di bawah mikroskop. Hasil tindak balas dinilai dalam peratusan: dari 0 hingga 20% - negatif, dari 21 hingga 30% - ragu, dari 31 hingga 50% - sedikit positif, dari 51 hingga 100% - positif. RIBT menjadi positif pada akhir tempoh utama sifilis dan tetap berlaku sepanjang tempoh penyakit ini, dan kadang-kadang setelah menjalani rawatan anti-sifilitik sepenuhnya. Dengan sifilis tersier, lesi spesifik organ dalaman, sistem saraf, dan sifilis kongenital, ketika CSF sering negatif, RIBT memberikan hasil positif pada 98-100% kes. Diagnosis sifilis laten semestinya disahkan oleh RIBT positif.

RIBT juga dapat memberikan hasil positif palsu jika serum ujian mengandungi zat treponemocidal (antibiotik - penisilin, tetrasiklin), yang menyebabkan imobilisasi treponema pucat yang tidak spesifik (toksik). Oleh itu, anda tidak dapat menguji darah untuk tindak balas ini lebih awal dari 2 minggu setelah berakhirnya pengambilan antibiotik.

Kajian serologi dapat digunakan untuk menentukan kekalahan sifilis sistem saraf, memeriksa cairan serebrospinal (serebrospinal) pesakit. Ia juga diperiksa untuk kehadiran protein, unsur enzim yang menunjukkan patologi dan membantu mendiagnosis satu bentuk atau neurosifilis yang lain. Cecair serebrospinal diperoleh dengan tusukan lumbal. Dilakukan secara aseptik, tidak menimbulkan bahaya dan dapat dilakukan oleh doktor walaupun secara rawat jalan. Kajian serologi cecair serebrospinal ditunjukkan dalam semua kes sifilis.

Pemeriksaan mikroskopik

Sekiranya sifilis primer, chancre pepejal yang dapat dilepaskan atau tusukan kelenjar getah bening diperiksa untuk treponema pucat. Sekiranya sifilis sekunder, bahan diambil dari permukaan papula yang terhakis pada kulit, selaput lendir, dari retakan, dan lain-lain. Sebelum mengambil bahan untuk membersihkan pelbagai bahan cemar, permukaan fokus (hakisan, bisul, retakan) mesti disapu dengan kain kapas-steril yang dibasahi dengan larutan isotonik. natrium klorida atau menetapkan losyen dengan larutan yang sama.
permukaan yang dicari dikeringkan dengan sapuan kering dan gelung platinum atau spatula sedikit merengsakan kawasan periferal, sambil sedikit memerah pangkal elemen dengan jari anda di sarung tangan getah sehingga cecair tisu (serum) muncul, dari mana persiapan untuk penyelidikan disiapkan. Mendapatkan cecair tisu penting untuk diagnosis sifilis, kerana treponemas pucat terletak di lumen kapilari limfatik, di celah tisu di sekitar saluran limfa dan saluran darah.

Tusukan kelenjar getah bening serantau

Kulit di atas kelenjar getah bening dirawat dengan alkohol 96% dan larutan alkohol iodin 3-5%. Kemudian 1 dan 2 jari tangan kiri membetulkan kelenjar getah bening. Dengan tangan kanan mereka mengambil jarum suntik steril dengan beberapa tetes larutan natrium klorida isotonik, yang disuntik selari dengan paksi membujur kelenjar getah bening. Jarum ditolak ke arah yang berlainan ke dinding seberang simpul kapsul dan isi jarum suntikan dimasukkan perlahan-lahan. Dengan jari tangan kiri, kelenjar getah bening diurut sedikit. Dengan penyingkiran jarum yang perlahan, piston jarum suntik ditarik secara serentak, menyedut kandungan kelenjar getah bening. Bahan tersebut dilekatkan pada slaid kaca (dengan sejumlah kecil bahan setetes larutan natrium klorida isotonik ditambahkan), ditutup dengan penutup penutup. Kajian mengenai ubat asli dilakukan dalam pandangan gelap menggunakan mikroskop cahaya optik dengan kondensor medan gelap (lensa 40, 7x, 10x atau 15x). Treponemas pucat juga boleh didapati dalam persediaan berwarna. Apabila diwarnai menurut Romanovsky-Giemsa, treponemas pucat berubah menjadi merah jambu, menurut Fontan dan Morozov coklat (hitam), menurut kaedah Burri, treponemas yang tidak dicat dikesan berlatar belakang gelap.

Diagnosis serologi

Penting dalam diagnosis sifilis, menilai keberkesanan rawatan, menetapkan kriteria penyembuhan, mengenal pasti bentuk pendam, tahan diberikan kepada reaksi serologi standard (klasik) dan spesifik. Reaksi serologi standard atau klasik (DAC) merangkumi:

• Reaksi Wassermann (RV),
• reaksi sedimen Kan dan Sachs-Vitebsk (sitokolik),
• tindak balas kaca (kaedah ekspres),

khusus:

• reaksi imobilisasi treponemal pucat (RIBT),
• tindak balas imunofluoresensi (RIF).

Reaksi Wassermann (RV)

- dikembangkan oleh A. Wasserman (A. Wasserman) bersama dengan A. Neisser (A. Neisser) dan C. Brook (C. Bruck) pada tahun 1906. Reaksi Wassermann didasarkan pada fenomena pengikatan pelengkap (reaksi Borde-Zhangu) dan memungkinkan penentuan antibodi anti-lipid (reagen). Menurut idea moden, reaksi Wassermann menentukan antibodi terhadap lipid makroorganisma, bukannya treponema pucat, dan reaksi itu menunjukkan proses autoimun yang disebabkan oleh denaturasi tisu makroorganisma dengan treponem pucat dengan pembentukan kompleks lipoprotein (konjugat) di mana lipid (haptens) adalah penentu.

RV biasanya dihantar dengan dua atau tiga antigen. Antigen Cardiolipin (ekstrak dari jantung lembu yang diperkaya dengan kolesterol dan lesitin) dan antigen treponemal (penggantungan ultrasound dari treponem pucat budaya anatogenik) paling sering digunakan. Bersama dengan reagen serum darah pesakit, antigen ini membentuk kompleks imun yang dapat menyerap dan mengikat pelengkap. Untuk penentuan visual kompleks yang terbentuk (reagen + antigen + pelengkap), sistem hemolitik (campuran eritrosit domba dengan serum hemolitik) digunakan sebagai petunjuk. Sekiranya pelengkap terikat pada fasa 1 reaksi (reagen + antigen + pelengkap), hemolisis tidak berlaku - sel darah merah mendakan menjadi endapan yang mudah dilihat (positif PB). Sekiranya pelengkap tidak terikat pada fasa 1 kerana ketiadaan reagen dalam serum ujian, ia akan digunakan oleh sistem hemolitik dan hemolisis akan berlaku (RV negatif). Keterukan hemolisis dalam penyusunan RV dianggarkan dengan nilai tambah: ketiadaan hemolisis sepenuhnya ++++ atau 4+ (RV sangat positif); hampir tidak memulakan hemolisis +++ atau 3+ (PB positif); hemolisis ketara ++ atau 2+ (PB lemah positif); gambar hemolisis yang tidak difahami ± (RV diragui); hemolisis lengkap - (Reaksi Wassermann negatif).

Sebagai tambahan kepada penilaian kualitatif PB, terdapat formulasi kuantitatif dengan pelbagai pengenceran serum (1:10, 1:20, 1:80, 1: 160, 1: 320). Titer reagen ditentukan oleh pencairan maksimum, yang masih memberikan hasil positif (4+). Perumusan kuantitatif RV penting dalam diagnosis beberapa bentuk klinikal jangkitan sifilik, serta dalam memantau keberkesanan rawatan. Pada masa ini, reaksi Wasserman disampaikan dengan dua antigen (cardiolipin dan treponemal sonic strain of Reuters). Sebagai peraturan, RV menjadi positif pada 5-6 minggu setelah jangkitan pada 25-60% pesakit, pada 7-8 minggu - pada 75-96%, pada 9-19 minggu - pada 100%, walaupun dalam beberapa tahun terakhir kadang-kadang lebih awal atau lebih lambat. Pada masa yang sama, titer reagen secara beransur-ansur meningkat dan mencapai nilai maksimum (1: 160-1: 320 dan lebih tinggi) sekiranya muncul ruam umum (sifilis sekunder segar). Apabila positif RV didiagnosis dengan sifilis seropositif primer.
Dengan sifilis berulang sekunder dan sekunder, RV positif pada 100% pesakit, tetapi pada pesakit kekurangan gizi dengan imuniti yang lemah, hasil negatif dapat diperhatikan. Selepas itu, titer reagen secara beransur-ansur berkurang dan dengan sifilis berulang sekunder biasanya tidak melebihi 1: 80-1: 120.
Pada sifilis tersier, RV positif pada 65-70% pesakit dan titer rendah reagen biasanya diperhatikan (1: 20-1: 40). Pada bentuk sifilis akhir (sifilis organ dalaman, sistem saraf), RV positif diperhatikan pada 50-80% kes. Titer reagen berkisar antara 1: 5 hingga 1: 320.
Dengan sifilis laten, RV positif diperhatikan pada 100% pesakit. Titer reagen adalah dari 1:80 hingga 1: 640, dan dengan sifilis laten terlambat dari 1:10 hingga 1:20. Penurunan cepat dalam titer reagen (hingga negatif sepenuhnya) semasa rawatan menunjukkan keberkesanan rawatan.

Kelemahan reaksi Wassermann adalah kepekaan yang tidak mencukupi (negatif pada peringkat awal sifilis primer). Ia juga negatif pada 1/3 pesakit, jika pada masa lalu mereka dirawat dengan antibiotik, pada pesakit dengan sifilis aktif tersier dengan luka pada kulit dan selaput lendir, radas tulang-artikular, organ dalaman, sistem saraf pusat, dengan sifilis kongenital akhir.
Kekurangan kekhususan - reaksi Wasserman boleh menjadi positif pada individu yang sebelumnya tidak sakit dan tidak mengalami sifilis. Khususnya, hasil positif RV yang positif (tidak spesifik) diperhatikan pada pesakit yang menderita lupus eritematosus sistemik, kusta, malaria, neoplasma malignan, luka hati, infark miokard yang luas dan penyakit lain, dan kadang-kadang pada orang yang benar-benar sihat.
Reaksi Wasserman positif palsu jangka pendek dikesan pada beberapa wanita sebelum atau selepas melahirkan, pada penyalahgunaan dadah, setelah anestesia, dan pengambilan alkohol. Sebagai peraturan, RV positif palsu lemah, selalunya dengan titer reagen rendah (1: 5-1: 20), positif (3+) atau lemah positif (2+). Dalam pemeriksaan serologi massa, kekerapan hasil positif palsu adalah 0.1-0.15%. Untuk mengatasi kekurangan kepekaan, gunakan pengaturan dalam keadaan sejuk (reaksi Collard) dan pada masa yang sama ia disertakan dengan reaksi serologi lain.

Reaksi sedimen Caen dan Sachs-Vitebsk

Reaksi Wassermann digunakan dalam kombinasi dengan dua reaksi sedimen (Kahn dan Sachs-Vitebsk), formulasi yang menghasilkan antigen yang lebih pekat. Kaedah ekspres (tindak balas mikro pada kaca) - merujuk kepada tindak balas lipid dan berdasarkan tindak balas pemendakan. Ia diletakkan dengan antigen kardiolipin tertentu, 1 tetes dicampurkan dengan 2-3 tetes serum darah ujian di lubang pinggan kaca khas.
Kelebihannya adalah kelajuan tindak balas (dalam 30-40 minit). Hasilnya dianggarkan dengan jumlah endapan dan ukuran serpihan. Keparahan ditakrifkan sebagai DAC - 4+, 3+, 2+ dan negatif. Harus diingat bahawa hasil positif palsu diperhatikan lebih kerap daripada dengan RV. Sebagai peraturan, metode ekspres digunakan untuk pemeriksaan massa sifilis, untuk pemeriksaan di makmal diagnostik klinikal, jabatan somatik dan hospital. Berdasarkan hasil metode ekspres, diagnosis sifilis dilarang, ia dikecualikan untuk digunakan pada wanita hamil, penderma, dan juga untuk pemantauan setelah perawatan.

Imobilisasi treponema pucat (RIBT)

Reaksi imobilisasi treponema pucat (RIBT) - dicadangkan pada tahun 1949 oleh R. Nelson (R.W. Nelson) dan M. Meyer (M. Mayer). Ia adalah ujian diagnostik yang paling spesifik untuk sifilis. Walau bagaimanapun, kerumitan dan kos pengeluaran yang tinggi membatasi penggunaannya. Dalam serum darah pesakit, penentuan antibodi spesifik video (immobilizins), yang menyebabkan imobilitas treponemas pucat dengan adanya pelengkap, dilakukan. Antigen adalah treponemia pucat patogen hidup yang dirembeskan dari arnab yang dijangkiti sifilis. Dengan bantuan mikroskop, pengiraan treponema pucat yang hilang (tidak bergerak) dilakukan dan hasil RIBT dinilai: imobilisasi treponemas pucat dari 51 hingga 100% adalah positif; dari 31 hingga 50% - sedikit positif; dari 21 hingga 30% - ragu-ragu; dari 0 hingga 20% - negatif.
RIBT penting dalam diagnosis pembezaan untuk membezakan reaksi serologi positif palsu dari reaksi akibat sifilis. Lewat menjadi positif daripada RV, RIF dan oleh itu tidak digunakan untuk diagnosis sifilis berjangkit, walaupun pada masa sekunder sifilis positif pada 85-100% pesakit.
Dalam tempoh sifilis tersier dengan kerosakan pada organ dalaman, sistem muskuloskeletal, sistem saraf, RIBT positif pada 98-100% kes (PB sering negatif).
Perlu diingat bahawa RIBT boleh menjadi positif palsu jika sediaan treponemocidal (penisilin, tetrasiklin, makrolit, dll.) Terdapat dalam serum yang menyebabkan imobilisasi treponema pucat yang tidak spesifik. Untuk tujuan ini, darah di RIBT diuji tidak lebih awal dari 2 minggu setelah berakhirnya pengambilan antibiotik dan ubat lain.
RIBT dan RIF semasa rawatan perlahan-lahan ditolak, oleh itu, ia tidak digunakan sebagai kawalan semasa rawatan.

Reaksi Imunofluoresensi (RIF)

Reaksi imunofluoresensi (RIF) - dikembangkan pada tahun 1954 oleh A.Coons dan pertama kali digunakan untuk mendiagnosis jangkitan sifilik Deacon, Falcone, Harris pada tahun 1957. RIF berdasarkan kaedah tidak langsung untuk menentukan antibodi pendarfluor. Antigen untuk pengeluaran adalah treponemy pucat tisu patogen, dipasang pada slaid kaca, di mana serum ujian digunakan. Sekiranya serum ujian mengandungi antibodi anti-treponemal yang berkaitan dengan IgM dan IgG, mereka kuat mengikat antigen treponemal, yang dikesan dalam mikroskop bercahaya menggunakan serum pendarfluor anti-spesies ("anti-manusia").
Hasil RIF diambil kira oleh intensiti cahaya treponemas pucat dalam penyediaan (cahaya kuning-hijau). Sekiranya tiada antibodi treponemal serum, treponemas pucat tidak dikesan. Dengan adanya antibodi, penderitaan treponemas pucat dikesan, tahap yang dinyatakan dalam nilai tambah: 0 dan 1+ - reaksi negatif; dari 2+ hingga 4+ - positif.
RIF merujuk kepada reaksi treponemal kumpulan dan dimasukkan ke dalam pencairan serum ujian 10 dan 200 kali (RIF-10 dan RIF-200). RIF-10 dianggap lebih sensitif, bagaimanapun, hasil positif yang tidak spesifik sering jatuh daripada ketika menetapkan RIF-200 (dicirikan oleh kekhususan yang lebih tinggi). Sebagai peraturan, RIF menjadi positif lebih awal daripada RV - positif pada sifilis seronegatif primer pada 80% pesakit, dalam 100% pada masa sifilis sekunder, selalu positif pada sifilis laten dan pada 95-100% kes dengan bentuk akhir dan sifilis kongenital.
Kekhususan RIF meningkat setelah rawatan awal serum ujian dengan antigen treponemal sorben-ultra-sonik yang mengikat antibodi kumpulan (RIF - abs).
Petunjuk untuk perumusan RIBT dan RIF adalah diagnosis sifilis laten untuk mengesahkan kekhususan kompleks reaksi lipid dalam kes jangkitan sifilik berdasarkan RV positif. RIBT dan RIF positif adalah bukti sifilis laten. Sekiranya RV positif palsu dalam pelbagai penyakit (lupus erythematosus sistemik, neoplasma malignan, dll.) Dan jika hasil RIBT dan RIF berulang adalah negatif, ini menunjukkan sifat RV yang tidak spesifik. Kecurigaan pada lesi sifilik akhir organ dalaman, sistem muskuloskeletal, sistem saraf dengan adanya RV negatif pada pesakit. Kecurigaan sifilis seronegatif primer, apabila pada pesakit dengan pelbagai kajian hakisan (ulser) terlepas dari permukaan, dengan tanda dari kelenjar getah bening serantau yang membesar, treponema pucat tidak dikesan - dalam kes ini hanya RIF diletakkan - 10.
Semasa memeriksa orang-orang dengan RV negatif yang melakukan hubungan seksual dan domestik jangka panjang dengan pesakit sifilis, kemungkinan kemungkinan mengobati mereka pada masa lalu dengan ubat-ubatan anti-sifilik yang menyebabkan RV negatif. Ujian imunosorben berkait enzim (ELISA, ELISA - uji imunosorben enzimelinked) - kaedah yang dikembangkan oleh E. Engvall et al., S. Avrames (1971). Intinya terdiri daripada menggabungkan antigen syphilitic yang terserap di permukaan pembawa fasa pepejal dengan antibodi serum darah ujian dan mengenal pasti kompleks antigen-antibodi tertentu menggunakan serum kekebalan antispesies berlabel enzim. Ini membolehkan anda menilai hasil ELISA secara visual mengikut tahap perubahan warna substrat di bawah tindakan enzim yang merupakan bahagian konjugat. Hasil ELISA yang tidak boleh dipercayai mungkin berlaku akibat pencairan bahan yang tidak mencukupi, pelanggaran keadaan suhu dan waktu, ketidaksesuaian pH larutan, pencemaran peralatan kaca makmal, teknik mencuci media yang tidak betul.

Reaksi hemaglutinasi pasif (RPHA)

Dicadangkan sebagai ujian diagnostik untuk sifilis T.Rathlev (1965.1967), T. Tomizawa (1966). Makromodifikasi reaksi disebut TRNA, mikromodifikasi disebut MNA-TP, versi automatik adalah AMNA-TR, dan reaksi dengan makrokapsul dari polyurea dan bukannya sel darah merah adalah MCA-TP. Sensitiviti dan kekhususan RPHA serupa dengan RIBT, RIF, tetapi RPGA kurang sensitif pada bentuk sifilis awal berbanding RIF-abs dan lebih besar pada yang kemudian dengan sifilis kongenital. RPGA dimasukkan dalam pilihan kualitatif dan kuantitatif.

Teknik pengumpulan darah untuk reaksi serologi

Untuk penyelidikan mengenai RV, RIF, darah RIBT diambil dari urat ulnar pada perut kosong atau tidak lebih awal dari 4 jam setelah dimakan dengan jarum suntik steril atau dengan satu jarum (graviti). Pada titik penangkapan, kulit dirawat terlebih dahulu dengan alkohol 70%. Jarum suntik dan jarum harus dibilas dengan larutan natrium klorida isotonik. 5-7 ml darah ujian dituangkan ke dalam tiub sejuk yang bersih dan kering. Kertas kosong dengan nama, inisial pesakit, jumlah sejarah perubatan atau kad pesakit luar, dan tarikh pengumpulan darah dilekatkan pada tabung uji. Setelah mengambil darah, tiub diletakkan di dalam peti sejuk dengan suhu + 4 ° + 8 ° C hingga keesokan harinya. Keesokan harinya, serum disalirkan untuk penyelidikan. Sekiranya darah tidak digunakan pada keesokan harinya, serum mesti disalirkan dari gumpalan dan disimpan di dalam peti sejuk tidak lebih dari 1 minggu. Untuk ujian untuk RIBT, tiub mesti disediakan khas dan steril. Sekiranya terdapat pelanggaran peraturan pengambilan darah untuk penyelidikan, ketidakpatuhan terhadap syarat-syarat, penyimpangan hasil dapat terjadi.
Tidak disarankan mengambil sampel darah untuk penyelidikan setelah makan, alkohol, pelbagai ubat, setelah pengenalan pelbagai vaksin, semasa kitaran haid pada wanita.
Untuk penyelidikan mengenai kaedah ekspres, darah dijaga dari hujung jari, seperti yang dilakukan ketika mengambilnya pada ESR, tetapi mereka mengambil darah 1 kapilari lagi. Kaedah ekspres juga dapat ditetapkan dengan serum darah yang diperoleh oleh venipuncture. Sekiranya terdapat keperluan untuk ujian darah di makmal terpencil, bukannya darah, anda boleh menghantar serum kering (kaedah tetes kering). Untuk melakukan ini, keesokan harinya setelah mengambil darah, serum dipisahkan dari gumpalan dan dikumpulkan dalam jarum suntik dalam jumlah 1 ml. Kemudian serum dituangkan dalam bentuk 2 bulatan yang berasingan pada sehelai kertas tebal (kertas lilin atau selofan) berukuran 6 × 8 cm. Nama, inisial subjek dan tarikh pengambilan sampel darah ditulis di pinggir bebas kertas. Kertas serum dilindungi dari sinar matahari langsung dan dibiarkan pada suhu bilik hingga keesokan harinya. Serum kering dalam bentuk lingkaran kecil dari filem berkaca kekuningan berkilat. Selepas itu, sehelai kertas dengan whey kering digulung sebagai serbuk farmasi dan dihantar ke makmal, menunjukkan diagnosis dan untuk tujuan apa ia diperiksa..

Rintangan serologi

Pada beberapa (2% atau lebih) pesakit dengan sifilis, walaupun terdapat terapi anti-sifilitik yang lengkap, terdapat tindak balas serologi negatif (ketiadaan) yang lambat selepas rawatan sehingga 12 bulan atau lebih. Terdapat apa yang disebut rintangan serologi, yang dalam beberapa tahun kebelakangan ini sering diperhatikan. Terdapat bentuk ketahanan serologi:

• Betul (mutlak, tanpa syarat) - perlu melakukan rawatan anti-sifilik tambahan, digabungkan dengan terapi tidak spesifik untuk meningkatkan daya tahan tubuh.
• Relatif - setelah rawatan yang tepat, treponemas pucat membentuk sista atau bentuk-L yang ada di dalam badan dalam keadaan rendah virulen dan, sebagai akibatnya, rawatan tambahan tidak mengubah petunjuk reaksi serologi, terutama RIF dan RIBT.

Pada masa yang sama, proses metabolik yang tidak signifikan berlaku dalam bentuk sista, dan cangkang cyst adalah protein asing (antigen). Untuk perlindungannya, tubuh menghasilkan antibodi spesifik yang positif atau tajam positif dalam perumusan reaksi serologi, ketiadaan manifestasi penyakit ini. Dengan bentuk-L, proses metabolik semakin berkurang dan sifat antigenik tidak ada atau sedikit dinyatakan. Antibodi spesifik tidak dihasilkan atau dalam jumlah kecil, reaksi serologi lemah positif atau negatif. Semakin lama jangka masa dari saat jangkitan, semakin banyak bilangan treponemas pucat berubah menjadi bentuk survival (sista, spora, bentuk-L, biji-bijian), di mana terapi anti-sifilik tidak berkesan.

Pseudoresistance - selepas rawatan, walaupun terdapat reaksi serologi positif, treponema pucat tidak ada di dalam badan. Tidak ada antigen dalam tubuh, tetapi pengeluaran antibodi berterusan, yang diperbaiki semasa pengeluaran reaksi serologi.
Rintangan serologi mungkin timbul kerana:

• rawatan rendah diri tanpa mengambil kira preskripsi dan tahap penyakit;
• dos yang tidak mencukupi dan terutamanya kerana tidak mempertimbangkan berat badan pesakit;
• pelanggaran selang antara pengenalan dadah;
• pemeliharaan treponemas pucat di dalam tubuh walaupun terdapat rawatan khusus, kerana ketahanan terhadap penicillin dan ubat kemoterapi lain apabila terdapat lesi tersembunyi dan teraba di organ dalaman, sistem saraf, kelenjar getah bening, yang tidak dapat diakses oleh ubat antibakteria (sering kali treponemas pucat dijumpai pada tisu parut bertahun-tahun selepas berakhirnya terapi, kadang-kadang ada kemungkinan untuk mengesan treponemas pucat di kelenjar getah bening 3-5 tahun selepas terapi antisyphilitic);
• pengurangan daya perlindungan dalam pelbagai penyakit dan mabuk (endokrinopati, alkoholisme, ketagihan dadah, dll.);
• keletihan umum (kurang makan vitamin, protein, lemak).

Di samping itu, reaksi serologi positif yang salah sering dikesan, tidak dikaitkan dengan kehadiran sifilis pada pesakit dan disebabkan oleh:

• bersamaan penyakit tidak spesifik organ dalaman, gangguan sistem kardiovaskular, rematik, disfungsi sistem endokrin dan saraf, dermatosis kronik yang teruk, neoplasma malignan;
• lesi sistem saraf (kecederaan teruk, gegar otak, kecederaan mental);
• kehamilan keracunan kronik dengan alkohol, ubat nikotin; penyakit berjangkit (malaria, tuberkulosis, hepatitis virus, disentri, ruam, demam kepialu dan kambuh).

Faktor-faktor ini boleh mempengaruhi kereaktifan imunologi organisma baik dalam tempoh perkembangan aktif manifestasi sifilik dan semasa regresi mereka.