Utama // Vaskulitis

Imunoglobulin A (IgA)

Cytomegalovirus adalah agen virus yang sangat berjangkit (iaitu sangat berjangkit) yang boleh menjangkiti manusia dengan pelbagai cara. Menurut klasifikasi, sitomegalovirus (atau cmv) adalah jenis herpes dari jenis kelima. Kerana tahap keagresifan yang tinggi, patogen ini terdapat dalam keadaan pendam di 95-98% orang di seluruh planet ini. Tidak semua orang mengalami sitomegali, kerana sistem kekebalan tubuh menghalang kerosakan virus, menghasilkan antibodi khusus untuk memerangi mikroorganisma patogen. Yang mana dan bila - yang akan ditentukan.

Jenis antibodi

Sistem imun manusia menghasilkan beberapa jenis antibodi untuk memerangi pelbagai patogen. Beberapa jenis imunoglobulin dibezakan: A, G, M, E, D. Setiap jenis bertanggungjawab untuk fungsi tertentu struktur pelindung. Ada yang berjuang dengan patogen virus, yang lain dengan mikroorganisma patogen, yang lain memulakan reaksi antihistamin dan detoksifikasi. Dalam kes sitomegalovirus, anti-imunoglobulin kelas G dan M (IgG dan IgM) mempunyai nilai diagnostik..

Ujian darah enzimatik seperti ELISA digunakan untuk mendiagnosis kehadiran atau ketiadaan sitomegalovirus di dalam badan. Secara berasingan, ujian PCR ditetapkan untuk mengesan DNA virus dalam aliran darah, tetapi ini adalah kajian yang sama sekali berbeza.

Mengenai perbezaan imunoglobulin IgG dan IgM

Bahan enzimatik dari dua kelas yang dijelaskan berbeza dalam kepentingan fungsinya..

Imunoglobulin Jenis M (IgM) bertanggungjawab terhadap reaksi awal sistem pertahanan badan. Sebaik sahaja agen virus (khususnya, CMV) masuk ke dalam badan, sistem kekebalan tubuh mula menghasilkan apa yang dipanggil bahan cepat (antibodi) untuk memerangi patogen patogen. Komponen enzimatik kelas M berbeza dalam dimensi yang ketara, tetapi hanya sesuai untuk tindak balas yang cepat dan memusnahkan virus di sini dan sekarang. Mereka tidak membentuk memori selular, kerana kekebalan seperti itu bersifat sementara. Reaksi berlangsung sehingga 5 bulan.

G-immunoglobulin (antibodi IgG terhadap sitomegalovirus) lebih kecil. Mereka dihasilkan oleh struktur pelindung badan lebih lewat, setelah beberapa minggu, atau bahkan berbulan-bulan. Dihasilkan secara aktif seumur hidup. Anti cmv ​​IgG membentuk memori yang stabil, oleh itu mereka menghalang virus sepanjang hayat pesakit.

Walaupun begitu, kekebalan berterusan terhadap sitomegalovirus tidak diperhatikan. Cukup untuk sistem kekebalan tubuh berfungsi, kerana gejala-gejala muncul dengan semangat yang baru dan penyakit ini mengambil bentuk akut.

Karakteristik dan kombinasi kuantitatif-kualitatif hasil analisis

Hasil dua analisis imunologi ini boleh berbeza dari segi kuantitatif dan kualitatif. Bergantung pada gabungan dua faktor, perbezaan berikut dibezakan:

1. Kedua-dua petunjuk itu negatif. Dalam kes ini, tidak ada jangkitan dengan sitomegalovirus. Ini adalah keadaan yang sangat jarang berlaku, yang dalam praktik perubatan berlaku tidak lebih dari 2% kes. Ia dianggap lebih cenderung dari kes biasa daripada kebiasaan. Ini, seperti yang telah disebutkan, adalah organisma yang sangat virulen.
2. Anti cmv ​​IgG negatif, IgM meningkat. Bermakna fasa akut penyakit ini, kerana imuniti belum terbentuk. Proses ini dicirikan oleh gejala yang jelas. Antara gejala khas lesi akut dapat dibezakan: demam hingga tanda subfebril-demam, kegagalan pernafasan (disebabkan oleh perkembangan pneumonia sekunder), ruam kulit yang kelihatan seperti papula pelbagai saiz dan bentuk, masalah dengan tekak, ginjal, pundi kencing, sekunder limfadenitis. Gambaran klinikal tidak selalu cukup terang untuk menentukan proses akut. Sekiranya tindak balas sistem imun cukup kuat, mungkin tidak ada gejala yang teruk..
3. Apa maksud Cmv IgG positif, IgM juga positif? Hasil positif (meningkat) untuk dua indikator bermaksud fasa subakut. Tubuh telah menyesuaikan diri dengan permulaan penyakit dan aktiviti virus dan telah mulai membentuk kekebalan yang stabil untuk pembendungan sitomegalovirus seumur hidup. Dalam tempoh ini, gejala seperti itu mungkin tidak ada, dari semasa ke semasa suhu badan meningkat, ruam kulit tunggal, tonsilitis (tonsilitis) dijumpai. Ini adalah saat yang paling penting untuk rawatan tertentu..
4. Analisis untuk IgG adalah positif, untuk IgM adalah negatif. Jenis gabungan yang serupa menunjukkan peralihan penyakit ke tahap pendam. Walaupun mengekalkan imuniti normal, sitomegali tidak berkembang. Nisbah hasil yang serupa adalah yang paling biasa dalam amalan klinikal. Hasilnya diperhatikan di hampir setiap wakil umat manusia. Walau bagaimanapun, semasa tempoh kehamilan, nilai IgG yang tinggi (melebihi normal) boleh menyebabkan sitomegali berulang dan masalah dengan anak. Perkara ini harus dipertimbangkan semasa merancang kehamilan. Bahaya tambahan ditunjukkan oleh akibat seperti itu apabila virus imunodefisiensi dikesan. Dalam kes ini, sitomegalovirus adalah bahaya yang mematikan, dan kehadiran nilai tinggi imunoglobulin G mengatakan sedikit tentang.

Secara ringkas mengenai ketersediaan, penyahkodan hasil analisis

Ketersediaan adalah petunjuk penting sistem imun dan keadaan virus di dalam badan. Menurut sains perubatan, ketersediaan difahami sebagai tahap keterkaitan kompleks antigen-antibodi. Dalam kes ini, antigen adalah virus spesies sitomegalovirus, dan antibodi adalah imunoglobulin spesifik. Semakin kuat hubungan antara antigen dan antibodi, semakin tinggi ketersediaannya. Aviditi juga dapat didefinisikan sebagai nisbah bilangan antibodi dengan jumlah agen virus patogen atau berjangkit. Hasilnya didekripsi seperti berikut:

1. Aviditi rendah diperhatikan sekiranya bilangan antibodi tidak melebihi 50%. Dalam kes ini, kemungkinan besar peningkatan IgM dan IgG negatif dikesan. Jangkitan baru berlaku. Kekebalan khusus baru mula dikembangkan.
2. Keadaan purata. Kekebalan terus terbentuk dan berada dalam lingkungan 55-60%. Nilai purata dianggap tidak berinformasi, oleh itu, pemeriksaan semula bahan biologi diperlukan setelah 1-2 minggu dari tarikh kelahiran. Ada kemungkinan jangkitan itu segar dan badan belum dapat menyesuaikan diri dan menyesuaikan diri.
3. Ketahanan tinggi. Ia dicirikan oleh angka di atas 60 peratus. Antibodi dihasilkan secara aktif dan mengikat protein protein agen virus dengan kuat. Kami bercakap mengenai kekebalan yang berterusan (yang, bagaimanapun, tidak menghalangi pembentukan semula sitomegali). Sistem pelindung tubuh memegang struktur patologi, seperti yang mereka katakan, "dalam pemeriksaan".

Prestasi mungkin berbeza dari pesakit ke pesakit. Dalam banyak aspek, hasilnya bergantung pada keadaan umum kesihatan manusia, umur dan jantina (ciri demografi).

Menguraikan hasilnya hanya boleh dilakukan oleh doktor, namun, untuk memahami sama ada nilainya normal atau tidak, anda perlu membandingkan hasilnya dengan indikator rujukan. Sebagai peraturan, ia ditunjukkan pada borang.

Titer normal (kepekatan antibodi dalam cecair biologi) IgG berada dalam 250 unit. Semua perkara di atas sudah menjadi petunjuk penting, yang menunjukkan perjalanan penyakit yang akut dan fungsi aktif sistem imun. Tahap imunoglobulin hingga 140 unit bermaksud hubungan dengan sitomegalovirus pada masa lalu dan ketiadaan proses akut pada masa ini. Walau bagaimanapun, walaupun di atas, ada kemungkinan tubuh mengatasi jangkitan dengan cara ini. Petunjuk utama adalah ketiadaan atau kehadiran gejala. Tafsiran hasil analisis perlu dilakukan bersamaan dengan petunjuk keberadaan.

Peningkatan nilai imunoglobulin tertentu sering menunjukkan jangkitan dengan sitomegalovirus. IgG untuk lama, IgM untuk segar (tidak selalu). Sifat proses dan resepnya dapat ditentukan oleh nisbah penunjuk analisis kuantitatif dan kualitatif. Penting untuk mempertimbangkan tahap ketahanan. Oleh itu, anda pasti dapat mengatakan sesuatu. Peranan penting dimainkan oleh keadaan umum pesakit. Tubuh dapat mengatasi virus dengan baik, dan kesejahteraan akan datang pada tahap yang sangat kritikal.

ANTIBODI

Antibodi adalah protein pecahan globulin serum darah manusia dan haiwan berdarah panas yang terbentuk sebagai tindak balas terhadap pengenalan pelbagai antigen (bakteria, virus, toksin protein, dll.) Ke dalam badan dan secara khusus berinteraksi dengan antigen yang menyebabkannya terbentuk. Dengan mengikat ke laman aktif (pusat) dengan bakteria atau virus, antibodi menghalang pembiakannya atau meneutralkan bahan toksik yang dikeluarkan olehnya. Kehadiran antibodi dalam darah menunjukkan bahawa tubuh berinteraksi dengan antigen terhadap penyakit yang ditimbulkannya. Sejauh mana imuniti bergantung pada antibodi dan sejauh mana antibodi hanya menyertai imuniti diputuskan berkaitan dengan penyakit tertentu. Penentuan tahap antibodi dalam serum darah memungkinkan kita menilai intensiti imuniti walaupun dalam keadaan ketika antibodi tidak memainkan peranan pelindung yang menentukan.

Kesan perlindungan antibodi yang terdapat dalam sera imun banyak digunakan dalam rawatan dan pencegahan penyakit berjangkit (lihat Seroprophylaxis, Serotherapy). Reaksi antibodi dengan antigen (reaksi serologi) digunakan dalam diagnosis pelbagai penyakit (lihat kajian Serologi).

Kandungan

Cerita

Sudah sekian lama mengenai bahan kimia tersebut. alam A. tahu sangat sedikit. Telah diketahui bahawa antibodi selepas pemberian antigen terdapat dalam serum darah, limfa, ekstrak tisu dan bahawa mereka bertindak balas secara khusus dengan antigennya. Kehadiran antibodi dinilai berdasarkan agregat yang dapat dilihat yang terbentuk semasa interaksi dengan antigen (aglutinasi, pemendakan) atau oleh perubahan sifat antigen (peneutralan toksin, lisis sel), tetapi hampir tidak ada yang diketahui substrat kimia antibodi mana.

Berkat penggunaan ultrasentrifugasi, imuno-elektroforesis, dan mobiliti protein di medan isoelektrik, antibodi telah terbukti tergolong dalam kelas globulin gamma, atau imunoglobulin.

Antibodi adalah globulin normal yang dibentuk semasa sintesis. Globulin imun yang diperoleh dengan mengimunisasi haiwan yang berbeza dengan antigen yang sama dan ketika mengimunisasi spesies haiwan yang sama dengan antigen yang berbeza mempunyai sifat yang berbeza, sama seperti globulin serum dari spesies haiwan yang berlainan tidak sama.

Kelas imunoglobulin

Imunoglobulin dihasilkan oleh sel-sel imunocompetent organ limfoid; mereka berbeza dalam berat molekul, pemalar pemendapan, mobiliti elektroforetik, kandungan karbohidrat dan aktiviti imunologi. Terdapat lima kelas (atau jenis) imunoglobulin:

Immunoglobulin M (IgM): berat molekul kira-kira 1 juta, mempunyai molekul kompleks; yang pertama muncul selepas imunisasi atau rangsangan antigenik, mempunyai kesan buruk pada mikroba yang memasuki aliran darah, menyumbang kepada fagositosis mereka; lebih lemah daripada imunoglobulin G, mengikat antigen larut, toksin bakteria; dimusnahkan dalam badan 6 kali lebih cepat daripada imunoglobulin G (contohnya, pada tikus, waktu paruh imunoglobulin M adalah 18 jam, dan masa imunoglobulin G adalah 6 hari).

Immunoglobulin G (IgG): berat molekul kira-kira 160,000, mereka dianggap sebagai antibodi standard, atau klasik: mereka dengan mudah melalui plasenta; terbentuk lebih perlahan daripada IgM; paling berkesan mengikat antigen larut, terutamanya eksotoksin, dan juga virus.

Immunoglobulin A (IgA): berat molekul kira-kira 160,000 atau lebih, dihasilkan oleh tisu limfoid selaput lendir, menghalang penurunan enzim sel-sel badan dan menentang kesan patogen kuman usus, dengan mudah menembusi penghalang sel badan, terkandung dalam kolostrum, air liur, air mata, mukus usus, usus peluh, dipisahkan oleh hidung, dalam darah dalam jumlah yang lebih kecil, mudah dihubungkan ke sel-sel badan; IgA muncul, nampaknya, dalam proses evolusi untuk melindungi selaput lendir dari serangan bakteria dan menyebarkan imuniti pasif kepada keturunan.

Immunoglobulin E (IgE): berat molekul kira-kira 190,000 (menurut R. S. Nezlin, 1972); nampaknya mereka adalah antibodi alahan - reagen yang disebut (lihat di bawah).

Immunoglobulin D (IgD): berat molekul sekitar 180,000 (menurut R. S. Nezlin, 1972); sangat sedikit yang diketahui mengenai mereka pada masa ini.

Struktur antibodi

Molekul imunoglobulin terdiri daripada dua subunit polipeptida yang tidak serupa - rantai ringan (L - dari cahaya Inggeris) dengan berat molekul 20,000 dan dua rantai berat (H - dari bahasa Inggeris berat) dengan berat molekul 60,000. Rantai ini, dihubungkan oleh jambatan disulfida, membentuk monomer utama Lh. Walau bagaimanapun, dalam keadaan bebas, monomer seperti itu tidak berlaku. Sebilangan besar molekul imunoglobulin terdiri daripada dimer (LH)₂, selebihnya adalah dari polimer (LH)_2n. Asid amino terminal N utama globulin manusia adalah aspartik dan glutamat, dan arnab - asid alanin dan aspartik. Porter (RR Porter, 1959), bertindak pada imunoglobulin papain, mendapati bahawa mereka terurai menjadi dua (I dan II) fragmen Fab dan satu fragmen Fc (III) dengan pemalar pemendapan 3.5S dan berat molekul sekitar 50,000. karbohidrat terikat pada serpihan Fc. Atas cadangan pakar WHO, penamaan serpihan antibodi berikut telah dibentuk: Fragmen Fab - monovalen, aktif menyambung ke antigen; Fragmen Fc - tidak berinteraksi dengan antigen dan terdiri daripada bahagian C-terminal dari rantai berat; Fd fragment adalah tapak rantai berat yang merupakan sebahagian dari fragmen Fab. Sebahagian daripada hidrolisis pepsin 5S dicadangkan untuk dinyatakan sebagai F (ab)₂, dan serpihan 3,5S monovalen ialah Fab.

Kekhususan antibodi

Salah satu sifat antibodi yang paling penting adalah kekhususannya, yang dinyatakan dalam kenyataan bahawa antibodi lebih aktif dan lebih lengkap berinteraksi dengan antigen yang dengannya badan itu dirangsang. Kompleks antigen-antibodi dalam kes ini mempunyai kekuatan terbesar. Antibodi dapat membezakan perubahan kecil dalam struktur antigen. Semasa menggunakan antigen konjugasi yang terdiri daripada protein dan bahan kimia sederhana yang disertakan - hapten, antibodi yang dihasilkan khusus untuk hapten, protein dan kompleks protein-hapten. Kekhususannya disebabkan oleh struktur kimia dan corak spasial antideterminan antibodi (pusat aktif, kumpulan reaktif), iaitu bahagian antibodi yang menghubungkannya dengan penentu antigen. Bilangan anti-penentu antibodi sering disebut valensi mereka. Jadi, molekul antibodi IgM boleh mempunyai hingga 10 valensi; Molekul antibodi IgG dan IgA divalen.

Menurut Karash (F. Karush, 1962), pusat IgG aktif terdiri daripada 10-20 residu asid amino, yang kira-kira 1% daripada semua asid amino molekul antibodi, dan, menurut Winkler (M. N. Winkler, 1963), pusat aktif terdiri daripada dari 3-4 residu asid amino. Tyrosine, lisin, triptofan, dan lain-lain terdapat dalam komposisi mereka. Antidetereteran jelas terletak di bahagian-bahagian amino-fragmen Fab. Segmen rantai ringan dan berat yang berubah-ubah terlibat dalam pembentukan pusat aktif, dengan bahagian kedua memainkan peranan utama. Mungkin rantai ringan hanya sebahagian terlibat dalam pembentukan pusat aktif atau menstabilkan struktur rantai berat. Antideterminant yang paling lengkap dibuat hanya dengan gabungan rantai ringan dan berat. Semakin banyak titik padanan antara antideterminan antibodi dan penentu antigen, semakin tinggi kekhususannya. Kekhususan yang berbeza bergantung pada urutan residu asid amino di pusat aktif antibodi. Pengekodan pelbagai jenis antibodi mengikut kekhususannya tidak jelas. Porter membolehkan tiga kemungkinan kekhususan.

1. Pembentukan bahagian stabil molekul imunoglobulin dikendalikan oleh satu gen, dan bahagian berubah oleh ribuan gen. Rantai peptida yang disintesis digabungkan menjadi molekul imunoglobulin di bawah pengaruh faktor selular khas. Antigen dalam kes ini bertindak sebagai faktor yang mencetuskan sintesis antibodi.

2. Molekul imunoglobulin dikodekan oleh gen yang stabil dan berubah-ubah. Dalam tempoh pembelahan sel, penggabungan gen pemboleh ubah berlaku, yang menentukan kepelbagaian mereka dan kebolehubahan bahagian molekul globulin.

3. Gen yang menyandikan bahagian pemboleh ubah molekul imunoglobulin rosak oleh enzim tertentu. Enzim lain membaiki kerosakan, tetapi kerana kesilapan membolehkan urutan nukleotida yang berlainan dalam gen tertentu. Ini disebabkan oleh urutan asid amino yang berbeza dalam bahagian molekul imunoglobulin yang berubah-ubah. Terdapat hipotesis lain, sebagai contoh. Burnet (F. M. Burnet, 1971).

Heterogenitas (heterogenitas) antibodi ditunjukkan dengan pelbagai cara. Sebagai tindak balas kepada pemberian antigen tunggal, antibodi terbentuk yang berbeza dalam pertalian dengan antigen, penentu antigen, berat molekul, mobiliti elektroforetik, asid amino N-terminal. Antibodi kumpulan terhadap pelbagai mikroba menyebabkan tindak balas silang terhadap pelbagai jenis dan jenis salmonella, shigella, Escherichia, protein haiwan, polisakarida. Antibodi yang dihasilkan adalah heterogen dalam kekhususannya berkenaan dengan antigen homogen atau penentu antigenik tunggal. Heterogenitas antibodi dicatat tidak hanya terhadap antigen protein dan polisakarida, tetapi juga terhadap kompleks, termasuk konjugasi, antigen dan melawan haptens. Adalah dipercayai bahawa heterogenitas antibodi ditentukan oleh mikroheterogenitas penentu antigen yang diketahui. Heterogenitas dapat disebabkan oleh pembentukan antibodi ke kompleks antigen-antibodi, yang diperhatikan semasa imunisasi berulang, perbezaan sel yang membentuk antibodi, dan juga kepunyaan antibodi terhadap kelas imunoglobulin yang berlainan, yang, seperti protein lain, mempunyai struktur antigenik yang dikendalikan secara genetik yang kompleks.

Jenis antibodi

Antibodi lengkap mempunyai sekurang-kurangnya dua pusat aktif dan, apabila digabungkan dengan antigen in vitro, menyebabkan reaksi yang dapat dilihat: penyatuan, pemendakan, pengikat pelengkap; meneutralkan toksin, virus, bakteria opsonize, menyebabkan fenomena visual lekatan imun, imobilisasi, pembengkakan kapsul, beban platelet. Reaksi berlanjutan dalam dua fasa: spesifik (interaksi antibodi dengan antigen) dan tidak spesifik (satu atau yang lain dari fenomena di atas). Umumnya diakui bahawa pelbagai reaksi serologi ditentukan oleh satu, bukan sebilangan besar antibodi, dan bergantung pada teknik formulasi. Terdapat antibodi lengkap termal yang bertindak balas dengan antigen pada t ° 37 °, dan sejuk (cryophilic), yang menunjukkan kesan pada t ° di bawah 37 °. Terdapat juga antibodi yang bertindak balas dengan antigen pada suhu rendah, dan kesan yang dapat dilihat ditunjukkan pada t ° 37 °; ini adalah antibodi biphasic, biothermal, yang ditetapkan oleh hemolysin Donat - Landsteiner. Semua kelas imunoglobulin yang diketahui mengandungi antibodi lengkap. Aktiviti dan kekhususan mereka ditentukan oleh titer, aviditi (lihat Aviditi), dan jumlah antideterminant. Antibodi IgM lebih aktif daripada antibodi IgG dalam reaksi hemolisis dan aglutinasi.

Antibodi yang tidak lengkap (tidak mendakan, menyekat, agglutinoid), seperti antibodi lengkap, mampu mengikat antigen yang sesuai, tetapi reaksi tidak disertai dengan fenomena pemendakan, pengagregatan, dll., Yang dilihat secara in vitro.

Antibodi tidak lengkap dijumpai pada manusia pada tahun 1944 terhadap antigen Rh, mereka dijumpai dalam jangkitan virus, rickettsial dan bakteria berkaitan dengan toksin dalam pelbagai keadaan patologi. Terdapat beberapa bukti bivalen antibodi yang tidak lengkap. Antibodi tidak lengkap bakteria mempunyai sifat pelindung: antitoksik, opsonis, bakteriologi; pada masa yang sama, antibodi tidak lengkap ditemukan dalam sejumlah proses autoimun - dengan penyakit darah, terutama anemia hemolitik.

Hetero-, iso- dan autoantibodi yang tidak lengkap boleh menyebabkan kerosakan sel, dan juga berperanan dalam berlakunya leuko- dan trombositopenia akibat ubat

Antibodi yang biasa dijumpai dalam serum darah haiwan dan manusia sekiranya tiada jangkitan atau imunisasi yang jelas dianggap antibodi normal (semula jadi). Asal-usul antibodi normal antibakteria dapat dikaitkan, khususnya, dengan rangsangan antigenik mikroflora normal badan. Pandangan ini secara teori dan eksperimen dibuktikan oleh kajian mengenai haiwan gnotobion dan bayi baru lahir dalam keadaan hidup normal. Persoalan mengenai fungsi antibodi normal secara langsung berkaitan dengan kekhususan tindakannya. L. A. Zilber (1958) percaya bahawa ketahanan individu terhadap jangkitan dan, sebagai tambahan, "kesediaan imunogenik tubuh" ditentukan oleh kehadirannya. Peranan antibodi normal dalam aktiviti bakteria darah, dalam opsonisasi semasa fagositosis ditunjukkan. Hasil kajian banyak penyelidik menunjukkan bahawa antibodi normal terutamanya makroglobulin - IgM. Beberapa penyelidik telah menemui antibodi normal dalam kelas imunoglobulin IgA dan IgG. Mereka boleh mengandungi antibodi yang tidak lengkap atau lengkap (antibodi normal terhadap sel darah merah - lihat Kumpulan Darah).

Sintesis antibodi

Sintesis antibodi berlangsung dalam dua fasa. Fasa pertama adalah induktif, pendam (1-4 hari), di mana antibodi dan sel pembentuk antibodi tidak dikesan; fasa kedua adalah produktif (bermula selepas fasa induktif), antibodi dijumpai dalam sel plasma dan cecair yang mengalir dari organ limfoid. Selepas fasa pertama pembentukan antibodi, kadar pertumbuhan antibodi yang sangat cepat bermula, selalunya kandungannya dapat berlipat ganda setiap 8 jam atau bahkan lebih cepat. Kepekatan maksimum pelbagai antibodi dalam serum darah selepas satu imunisasi dicatatkan pada hari ke-5, ke-7, ke-10 atau ke-15; selepas suntikan antigen yang disimpan - pada hari ke-21-30 atau ke-45. Kemudian setelah 1-3 bulan atau lebih, titer antibodi turun dengan mendadak. Walau bagaimanapun, kadang-kadang tahap antibodi yang rendah selepas imunisasi dicatat dalam darah selama beberapa tahun. Didapati bahawa imunisasi primer dengan sebilangan besar antigen yang berlainan disertai dengan kemunculan antibodi IgM (19S) pada mulanya, kemudian untuk jangka waktu yang pendek - antibodi IgM dan IgG (7S) dan, akhirnya, beberapa antibodi 7S ringan. Rangsangan berulang organisma peka dengan antigen mempercepat pembentukan kedua kelas antibodi, memendekkan fasa laten pembentukan antibodi, masa sintesis antibodi 19S dan mempromosikan sintesis keutamaan antibodi 7S. Selalunya antibodi 19S tidak muncul sama sekali.

Perbezaan ketara antara fasa induktif dan produktif pembentukan antibodi dijumpai ketika mempelajari kepekaan mereka terhadap sejumlah pengaruh, yang sangat penting untuk memahami sifat profilaksis tertentu. Sebagai contoh, diketahui bahawa pendedahan sebelum penundaan imunisasi atau sepenuhnya menghalang pembentukan antibodi. Penyinaran dalam fasa pembiakan pembentukan antibodi tidak mempengaruhi kandungan antibodi dalam darah.

Pengasingan dan pemurnian antibodi

Untuk memperbaiki kaedah pengasingan dan pemurnian antibodi, imunosorben telah dicadangkan. Kaedah ini didasarkan pada penukaran antigen larut menjadi tidak larut dengan melampirkannya melalui ikatan kovalen ke pangkalan tidak larut dari selulosa, Sephadex atau polimer lain. Kaedah ini memungkinkan untuk mendapatkan antibodi yang sangat disucikan dalam kuantiti yang banyak. Proses pengasingan antibodi menggunakan imunosorben merangkumi tiga peringkat:

1) pengambilan antibodi dari serum imun;

2) mencuci imunosorben dari protein tidak spesifik;

3) pembelahan antibodi dari imunosorben yang dicuci (biasanya dengan larutan penyangga dengan nilai pH rendah). Sebagai tambahan kepada kaedah ini, kaedah lain untuk membersihkan antibodi juga diketahui. Mereka boleh dibahagikan kepada dua kumpulan: spesifik dan tidak spesifik. Yang pertama didasarkan pada pemisahan antibodi dari kompleks antigen yang tidak larut - antibodi (endapan, aglutinat). Ia dijalankan oleh pelbagai bahan; kaedah pencernaan antigen antigen atau toksin flokulat yang meluas - antitoksin amilase, trypsin, pepsin. Elusi termal juga digunakan pada suhu 37–56 °.

Kaedah tidak spesifik untuk pemurnian antibodi berdasarkan pengasingan globulin gamma: elektroforesis gel, kromatografi pada resin pertukaran ion, fraksinasi dengan penyaringan gel melalui Sephadex. Kaedah pemendakan dengan natrium sulfat atau amonium banyak diketahui. Kaedah ini boleh digunakan dalam kes kepekatan tinggi antibodi dalam serum, misalnya, dengan hiperimunisasi..

Penapisan gel melalui Sephadex, serta penggunaan resin pertukaran ion, memungkinkan pemisahan antibodi dengan ukuran molekulnya.

Penggunaan antibodi

Antibodi, terutama gamma globulin, digunakan untuk rawatan dan pencegahan difteria, campak, tetanus, gangren gas, antraks, leptospirosis, terhadap staphylococci, rabies, influenza, dan lain-lain. Sera diagnostik yang disiapkan dan dimurnikan khas digunakan dalam pengenalpastian serologi patogen (lihat Pengenalan mikrob). Didapati bahawa pneumococci, staphylococci, salmonella, bacteriophages, dll., Menyerap antibodi yang sesuai, mematuhi platelet, eritrosit dan zarah asing yang lain. Fenomena ini dipanggil ketahanan badan. Telah ditunjukkan bahawa reseptor protein platelet dan eritrosit, yang dihancurkan oleh trypsin, papain, dan formalin, berperanan dalam mekanisme fenomena ini. Reaksi kepatuhan imun bergantung pada suhu. Ini diambil kira oleh kepatuhan antigen korpuskular atau oleh hemagglutination kerana antigen larut dengan adanya antibodi dan pelengkap. Reaksi sangat sensitif dan dapat digunakan untuk menentukan pelengkap dan jumlah antibodi yang sangat kecil (0,005-0,01 μg nitrogen). Lekatan imun meningkatkan fagositosis leukosit.

Teori moden pembentukan antibodi

Terdapat teori instruktif pembentukan antibodi, menurut Crimea antigen terlibat secara langsung atau tidak langsung dalam pembentukan imunoglobulin spesifik, dan teori yang melibatkan pembentukan antibodi yang sudah ada secara genetik terhadap semua kemungkinan antigen atau sel yang mensintesis antibodi ini. Ini termasuk teori pemilihan dan teori penindasan - derepresi, yang memungkinkan sintesis sebarang antibodi oleh satu sel. Teori juga dicadangkan yang bertujuan untuk memahami proses tindak balas imunologi pada tahap keseluruhan organisma, dengan mempertimbangkan interaksi pelbagai sel dan idea yang diterima umum mengenai sintesis protein dalam tubuh.

Teori matriks Gaurowitz-Pauling langsung mengurangkan fakta bahawa antigen, memasuki sel yang menghasilkan antibodi, berperanan sebagai matriks yang mempengaruhi pembentukan molekul imunoglobulin dari rantai peptida, sintesisnya berjalan tanpa penyertaan antigen. “Intervensi” antigen berlaku hanya pada fasa kedua pembentukan molekul protein - fasa memutar rantai peptida. Antigen mengubah asid N-amino terminal antibodi masa depan (imunoglobulin atau rantai peptida individu) sehingga menjadi pelengkap kepada penentu antigen dan mudah bersentuhan dengannya. Antibodi yang terbentuk dibelah dari antigen, memasuki aliran darah, dan antigen yang dilepaskan mengambil bahagian dalam pembentukan molekul antibodi baru. Teori ini telah menimbulkan sejumlah penolakan serius. Ia tidak dapat menjelaskan pembentukan toleransi imunologi; jumlah antibodi yang lebih baik yang dihasilkan oleh sel per unit masa dengan bilangan molekul antigen yang jauh lebih kecil di dalamnya; jangka masa penghasilan antibodi oleh tubuh, yang dihitung selama bertahun-tahun atau sepanjang hayat, dibandingkan dengan tempoh pengekalan antigen yang lebih pendek dalam sel, dan lain-lain. Ia juga harus diambil kira bahawa sel-sel plasma atau limfoid yang menghasilkan antibodi tidak mengasimilasi antigen, walaupun terdapat antigen asli atau serpihan dalam sel mensintesis antibodi tidak dapat dikecualikan sepenuhnya. Baru-baru ini, Gaurowitz (F. Haurowitz, 1965) mengusulkan konsep baru, yang mana antigen berubah bukan hanya sekunder, tetapi juga struktur utama imunoglobulin.

Teori matriks tidak langsung Burnet - Fenner mendapat kemasyhuran pada tahun 1949. Penulisnya percaya bahawa makromolekul antigen dan kemungkinan besar penentunya meresap ke dalam nukleus sel-sel kuman dan menyebabkan perubahan tetap di dalamnya, yang hasilnya adalah pembentukan antibodi terhadap antigen ini. Analogi dibenarkan antara proses yang dijelaskan dan transduksi bakteria. Kualiti baru pembentukan globulin imun yang diperoleh oleh sel dihantar ke keturunan sel dalam beberapa generasi. Walau bagaimanapun, persoalan peranan antigen dalam proses yang dijelaskan kontroversial..

Keadaan inilah yang menyebabkan teori pemilihan semula jadi Erne (K. Jerne, 1955).

Teori pemilihan semula jadi Erne. Menurut teori ini, antigen bukan matriks untuk sintesis antibodi dan tidak menyebabkan perubahan genetik dalam sel penghasil antibodi. Peranannya dikurangkan kepada pemilihan antibodi "normal" yang ada yang berlaku secara spontan kepada pelbagai antigen. Ini berlaku seolah-olah: antigen, setelah masuk ke dalam badan, menemui antibodi yang sesuai, bergabung dengannya; kompleks antigen-antibodi yang dihasilkan diserap oleh sel-sel yang menghasilkan antibodi, dan yang terakhir mendapat insentif untuk menghasilkan antibodi seperti ini.

Teori pemilihan klonal Burnet (F. Burnet) adalah pengembangan lebih lanjut mengenai idea pemilihan Erne, tetapi bukan mengenai antibodi, tetapi sel yang menghasilkan antibodi. Burnet percaya bahawa sebagai hasil proses pembezaan umum dalam tempoh embrio dan selepas bersalin, banyak klon sel-sel limfoid atau imunologi yang kompeten terbentuk dari sel mesenchymal yang dapat bertindak balas dengan pelbagai antigen atau penentu mereka dan menghasilkan antibodi - imunoglobulin. Sifat tindak balas sel limfoid terhadap antigen dalam tempoh embrio dan selepas bersalin adalah berbeza. Embrio sama sekali tidak menghasilkan globulin, atau mensintesisnya sedikit. Walau bagaimanapun, diasumsikan bahawa klon sel yang mampu bertindak balas dengan penentu antigenik protein mereka sendiri bertindak balas dengan mereka dan musnah akibat reaksi ini. Jadi, sel yang membentuk anti-A-aglutinin pada orang dengan kumpulan darah A dan anti-B-agglutinin pada orang dengan kumpulan darah B kemungkinan akan mati. Sekiranya anda memperkenalkan antigen ke embrio, ia akan memusnahkan klon sel yang sesuai dengan cara yang sama. dan bayi yang baru lahir sepanjang hayat seterusnya secara teorinya akan toleran terhadap antigen ini. Proses memusnahkan semua klon sel ke protein embrio mereka sendiri berakhir pada saat kelahirannya atau keluar dari telur. Sekarang bayi yang baru lahir hanya memiliki "miliknya", dan dia mengenali "makhluk asing" yang masuk ke dalam tubuhnya. Burnet juga memungkinkan pemeliharaan klon sel "terlarang" yang mampu bertindak balas dengan autoantigen organ yang, semasa pengembangan, diasingkan dari sel yang menghasilkan antibodi. Pengiktirafan "alien" dijamin oleh klon sel mesenchymal yang tersisa, di permukaannya ada antideterminant yang sesuai (reseptor, antibodi selular), yang melengkapi penentu antigen "alien". Sifat reseptor ditentukan secara genetik, iaitu, dikodkan pada kromosom dan tidak dimasukkan ke dalam sel bersama dengan antigen. Kehadiran reseptor siap pasti menyebabkan reaksi klon sel ini dengan antigen ini, akibatnya sekarang adalah dua proses: pembentukan antibodi khusus - imunoglobulin dan pendaraban sel-sel klon ini. Burnet mengakui bahawa sel mesenchymal yang telah menerima rangsangan antigenik, dalam urutan mitosis, menimbulkan populasi sel anak perempuan. Sekiranya sel seperti itu telah menetap di medula kelenjar getah bening, ia menimbulkan pembentukan sel plasma, apabila ia menetap di folikel limfa - ke limfosit, di sumsum tulang - ke eosinofil. Sel anak perempuan terdedah kepada mutasi somatik yang tidak dapat dipulihkan. Semasa mengira keseluruhan organisma, jumlah sel bermutasi setiap hari boleh menjadi 100 000 atau 10 juta, dan, oleh itu, mutasi akan memberikan klon sel kepada antigen apa pun. Teori Burnet menimbulkan minat yang besar di kalangan penyelidik dan sebilangan besar eksperimen pengesahan. Bukti teori yang paling penting adalah bukti adanya reseptor imunoglobulin seperti antibodi pada pendahuluan sel penghasil antibodi (limfosit yang berasal dari sumsum tulang) dan adanya mekanisme pengecualian interistronik dalam sel penghasil antibodi berhubung dengan antibodi dengan kekhususan yang berbeza.

Teori penindasan dan derepresi dirumuskan oleh L. Szilard pada tahun 1960. Menurut teori ini, setiap sel yang menghasilkan antibodi berpotensi mensintesis antibodi ke antigen apa pun, tetapi proses ini dihambat oleh penindas enzim yang terlibat dalam sintesis imunoglobulin. Pada gilirannya, pembentukan penindas dapat dihambat oleh pengaruh antigen. Sylard percaya bahawa pembentukan antibodi dikawal oleh gen yang tidak mudah dicerna. Jumlah mereka mencapai 10,000 untuk setiap satu set kromosom (haploid).

Lederberg (J. Lederberg) percaya bahawa dalam gen yang bertanggungjawab untuk sintesis globulin, terdapat laman web yang mengawal pembentukan pusat aktif antibodi. Biasanya, fungsi laman web ini dihambat, dan oleh itu terdapat sintesis globulin normal. Di bawah pengaruh antigen, dan juga, di bawah pengaruh hormon tertentu, laman gen yang bertanggungjawab untuk pembentukan pusat aktif antibodi disinhibit dan dirangsang, dan sel mula mensintesis globulin imun.

Menurut H. N. Zhukov-Verezhnikov (1972), prekursor antibodi evolusi adalah enzim pelindung yang serupa dengan yang muncul dalam bakteria dengan ketahanan terhadap antibiotik yang diperoleh. Seperti antibodi, enzim terdiri daripada bahagian aktif (berkenaan dengan substrat) dan bahagian molekul pasif. Karena ekonominya, mekanisme "satu enzim - satu substrat" ​​telah digantikan oleh mekanisme "molekul tunggal dengan bahagian yang berubah-ubah," iaitu, antibodi dengan pusat aktif yang berubah-ubah. Maklumat mengenai pembentukan antibodi dilaksanakan di zona "gen cadangan", atau di "zona redundansi" pada DNA. Kelebihan seperti itu, nampaknya, dapat dilokalisasi dalam DNA nuklear atau plasmid, yang menyimpan "maklumat evolusi. yang memainkan peranan mekanisme dalaman yang "merancang" kawalan kebolehubahan keturunan. " Hipotesis ini mengandungi komponen instruktif, tetapi tidak sepenuhnya instruktif..

P.F. Zdrodovsky menetapkan antigen sebagai peranan penekan gen tertentu yang mengawal sintesis antibodi pelengkap. Pada masa yang sama, antigen, seperti yang diakui oleh Zdrodovsky, sesuai dengan teori Selye, menjengkelkan adenohypophysis, yang mengakibatkan pengeluaran hormon pertumbuhan (STH) dan hormon adrenokortikotropik (ACTH). STH merangsang reaksi plasmacytic dan antibodi yang membentuk organ limfoid, yang seterusnya dirangsang oleh antigen, dan ACTH, yang bertindak pada korteks adrenal, menyebabkannya melepaskan kortison. Ini yang terakhir dalam sistem imun menghalang reaksi plasmacytic organ limfoid dan sintesis antibodi oleh sel. Semua peruntukan ini disahkan secara eksperimen..

Tindakan sistem kelenjar pituitari - adrenal pada penghasilan antibodi hanya dapat dikesan pada tubuh yang sebelumnya diimunisasi. Sistem inilah yang mengatur reaksi serologi anamnestic sebagai tindak balas kepada pengenalan pelbagai rangsangan tidak spesifik ke dalam tubuh.

Kajian mendalam mengenai perubahan sel dalam proses tindak balas imunologi dan pengumpulan sejumlah besar fakta baru membuktikan kedudukan bahawa tindak balas imunologi hanya dilakukan sebagai hasil interaksi sel tertentu yang bekerjasama. Selaras dengan ini, beberapa hipotesis dikemukakan..

1. Teori kerjasama dua sel. Banyak fakta telah terkumpul yang menunjukkan bahawa tindak balas imunologi dalam tubuh dilakukan dalam keadaan interaksi pelbagai jenis sel. Terdapat bukti bahawa makrofag adalah yang pertama mengasimilasi dan memodifikasi antigen, tetapi kemudian sel limfoid "diperintahkan" mengenai sintesis antibodi. Pada masa yang sama, telah ditunjukkan bahawa kerjasama juga berlaku antara limfosit yang tergolong dalam subpopulasi yang berlainan: antara T-limfosit (bergantung kepada timus, antenreaktif, yang berasal dari kelenjar timus) dan sel-B (bebas timus, pendahulu sel pembentuk antibodi, limfosit sumsum tulang).

2. Teori kerjasama tiga sel. Menurut pandangan Roitt (I. Roitt) dan lain-lain (1969), antigen ditangkap dan diproses oleh makrofag. Antigen seperti itu merangsang limfosit reaktif antigen yang mengalami transformasi menjadi sel blastoid, yang memberikan hipersensitiviti yang tertunda dan berubah menjadi sel memori imunologi yang lama. Sel-sel ini bekerjasama dengan sel-sel progenitor pembentuk antibodi, yang pada gilirannya membezakan dengan berkembang biak menjadi sel penghasil antibodi. Menurut Richter (M. Richter, 1969), kebanyakan antigen mempunyai pertalian yang lemah untuk sel pembentuk antibodi, oleh itu, interaksi proses berikut diperlukan untuk penghasilan antibodi: antigen + makrofag - antigen yang diproses + antigen-reaktif sel - antigen yang diaktifkan + pendahulu sel yang membentuk antibodi - antibodi. Sekiranya pertalian antigen tinggi, prosesnya akan seperti ini: antigen + pendahulu sel pembentuk antibodi - antibodi. Diasumsikan bahawa dalam keadaan rangsangan berulang dengan antigen, yang terakhir secara langsung bersentuhan dengan sel memori yang membentuk antibodi atau imunologi. Kedudukan ini disahkan oleh rintangan jarak yang lebih besar dari tindak balas imunologi berulang daripada yang utama, yang dijelaskan oleh rintangan sel yang berbeza yang mengambil bahagian dalam tindak balas imunologi. Mengemukakan perlunya kerjasama tiga sel dalam genesis antibodi, R.V. Petrov (1969, 1970) percaya bahawa sintesis antibodi akan berlaku hanya jika sel induk (pendahulu sel pembentuk antibodi) secara serentak menerima antigen yang diproses dari makrofag dan pemicu imunopoiesis dari sel antigen-reaktif, terbentuk setelah rangsangan (antigen-reactive cell) oleh antigen. Sekiranya sel induk hanya bersentuhan dengan antigen yang diproses oleh makrofag, toleransi imunologi akan dibuat (lihat Toleransi imunologi). Sekiranya terdapat hubungan antara sel induk dan sel antigen-reaktif sahaja, maka imunoglobulin bukan spesifik disintesis. Diandaikan bahawa mekanisme ini mendasari ketidakaktifan sel induk yang tidak diketahui oleh limfosit, kerana pemicu imunopoiesis, memasuki sel stem alogenik, adalah antimetabolit untuknya (sel-sel syngeneik adalah sel-sel dengan genom yang sama, sel-sel alogenik adalah jenis yang sama, dengan komposisi genetik yang berbeza).

Antibodi alahan

Antibodi alergi adalah imunoglobulin spesifik yang dihasilkan oleh tindakan alergen pada manusia dan haiwan. Ini merujuk kepada antibodi yang beredar di dalam darah sekiranya berlaku reaksi alergi jenis segera. Terdapat tiga jenis antibodi alergi utama: pemekaan kulit, atau reagen; menyekat dan hemagglutinating. Ciri biologi, kimia dan fizikokimia antibodi alahan seseorang adalah pelik (tab.).

Sifat-sifat ini berbeza dengan ketara dari sifat-sifat mendakan, antibodi pengikat pelengkap, aglutinin, dan lain-lain yang dijelaskan dalam imunologi.

Reagen biasanya digunakan untuk menunjukkan antibodi pemekaan kulit manusia yang homolog. Ini adalah jenis antibodi manusia alergi yang paling penting, sifat utamanya adalah keupayaan untuk melakukan reaksi pasif peningkatan kepekaan terhadap kulit penerima yang sihat (lihat reaksi Prausnitz-Kustner). Reagen mempunyai sebilangan sifat ciri yang membezakannya dengan antibodi imun yang cukup dipelajari. Bagaimanapun, banyak persoalan mengenai sifat reagen dan sifat imunologi mereka masih belum dapat diselesaikan. Secara khusus, masalah yang tidak dapat diselesaikan adalah homogenitas atau heterogenitas reagen dalam arti kepunyaan mereka dalam kelas imunoglobulin tertentu.

Memblokir antibodi berlaku pada pesakit dengan pollinosis dalam proses terapi hiposensitisasi spesifik terhadap antigen yang dilakukan dengan hiposensitisasi. Sifat antibodi jenis ini menyerupai antibodi pemendapan..

Antibodi hemaglutinasi biasanya difahami sebagai antibodi serum manusia dan haiwan yang mampu secara khusus menggabungkan sel darah merah yang digabungkan dengan alergen serbuk sari (reaksi tidak langsung, atau pasif, reaksi hemaglutinasi). Pengikatan permukaan sel darah merah ke alergen debunga dicapai dengan pelbagai kaedah, misalnya, menggunakan tanin, formalin, benzidin dua kali diazot. Antibodi hemaglutinasi dapat dijumpai pada orang dengan hipersensitiviti terhadap debunga tumbuhan, baik sebelum dan sesudah terapi hiposensitisasi tertentu. Semasa terapi ini, transformasi reaksi negatif menjadi positif atau peningkatan titisan reaksi hemaglutinasi berlaku. Antibodi hemaglutinasi mempunyai sifat terserap lebih cepat pada sel darah merah yang dirawat dengan alergen debunga, terutama sebahagian pecahannya. Imunosorben menghilangkan antibodi hemagglutinating lebih cepat daripada reagen. Kegiatan hemaglutinasi juga terkait dengan beberapa tahap dengan antibodi sensitif kulit, bagaimanapun, peranan antibodi sensitif kulit dalam hemaglutinasi nampaknya kecil, kerana tidak ada hubungan antara antibodi sensitif kulit dan hemagglutinating. Sebaliknya, terdapat hubungan antara hemagglutinating dan blocking antibodi, baik pada individu yang alah terhadap debunga tumbuhan dan pada individu yang sihat yang diimunisasi dengan debunga tumbuhan. Kedua-dua jenis antibodi ini mempunyai banyak sifat yang serupa. Dalam proses terapi hiposensitisasi tertentu, peningkatan tahap kedua-duanya dan jenis antibodi lain berlaku. Antibodi hemaglutinasi terhadap penisilin tidak serupa dengan antibodi yang memekatkan kulit. Sebab utama pembentukan antibodi hemagglutinating adalah terapi penisilin. Ternyata, antibodi hemaglutinasi harus diberikan kepada kelompok antibodi yang disebut oleh beberapa penulis sebagai "saksi antibodi".

Pada tahun 1962, W. Shelley mencadangkan ujian diagnostik khas berdasarkan apa yang disebut degranulasi leukosit darah arnab basofilik di bawah reaksi alergen dengan antibodi tertentu. Walau bagaimanapun, sifat antibodi yang mengambil bahagian dalam reaksi ini dan hubungannya dengan reagen yang beredar tidak dapat dipahami dengan baik, walaupun ada bukti korelasi jenis antibodi ini dengan tahap reagen pada pasien dengan pollinosis.

Menentukan nisbah alergen dan serum ujian yang optimum adalah sangat mustahak dari segi praktikal, terutamanya dalam kajian dengan jenis alergen, maklumat yang belum terdapat dalam literatur yang berkaitan.

Jenis antibodi berikut boleh dikaitkan dengan antibodi alahan haiwan: 1) antibodi dalam anafilaksis eksperimen; 2) antibodi pada penyakit alahan haiwan secara spontan; 3) antibodi yang berperanan dalam perkembangan reaksi Arthus (seperti mendakan). Dalam anafilaksis eksperimen, baik umum dan tempatan, jenis antibodi anafilaksis khas dengan sifat sensitif secara pasif pada kulit haiwan dari spesies yang sama terdapat dalam darah haiwan.

Telah ditunjukkan bahawa pemekaan anafilaksis babi guinea oleh debunga alergen meadow pollen disertai dengan peredaran antibodi sensitif kulit dalam darah. Badan sensitif kulit ini mempunyai kemampuan untuk melakukan pemekaan kulit pasif homolog in vivo. Bersama dengan antibodi sensitif kulit homolog ini, secara umum kepekaan kelinci percobaan dengan alergen dari debunga debunga timothy dalam darah, antibodi dikesan yang dikesan oleh hemaglutinasi pasif dengan benzidin bis-diazot. Antibodi sensitif kulit yang melakukan pemindahan pasif homolog dan mempunyai korelasi positif dengan anafilaksis diklasifikasikan sebagai antibodi anafilaksis homologis, atau antibodi homositopropik. Dengan menggunakan istilah "antibodi anafilaksis", penulis mengaitkannya sebagai peranan utama dalam reaksi anafilaksis. Kajian mula muncul yang mengesahkan adanya antibodi homositopropik terhadap antigen protein dan konjugat dalam pelbagai jenis haiwan eksperimen. Beberapa pengarang mengenal pasti tiga jenis antibodi yang terlibat dalam reaksi alahan dari jenis terdekat. Ini adalah antibodi yang berkaitan dengan jenis baru imunoglobulin (IgE) pada manusia dan antibodi serupa pada monyet, anjing, arnab, tikus, tikus. Jenis antibodi kedua adalah antibodi jenis babi guinea, yang dapat diperbaiki pada sel mast dan tisu isologous. Mereka berbeza dalam sebilangan sifat, khususnya, ia lebih termostabil. Dipercayai bahawa antibodi jenis IgG juga boleh menjadi jenis antibodi anafilaksis kedua pada manusia. Jenis ketiga adalah antibodi yang mensensitifkan tisu heterologi yang dimiliki, misalnya, babi guinea di kelas γ₂. Pada manusia, hanya antibodi IgG yang mempunyai kemampuan untuk memekatkan kulit babi guinea.

Dalam penyakit haiwan, antibodi alahan akibat reaksi alergi spontan dijelaskan. Antibodi ini bersifat termolabile dan mempunyai sifat sensitif pada kulit..

Antibodi yang tidak lengkap digunakan dalam bidang perubatan ketika menentukan antigen sejumlah sistem isoserologi (lihat Jenis Darah) untuk menentukan darah milik orang tertentu dalam kes kesalahan jenayah (pembunuhan, kesalahan seksual, kemalangan jalan raya, kecederaan tubuh, dll.), Serta pemeriksaan terhadap ayah dan ibu yang dipertikaikan. Tidak seperti antibodi penuh, ia tidak menyebabkan pengagregatan sel darah merah dalam garam. Antaranya, dua jenis antibodi dibezakan. Yang pertama daripadanya adalah agglutinoids. Antibodi ini dapat menyebabkan sel darah merah melekat bersama dalam persekitaran protein atau makromolekul. Jenis antibodi kedua adalah cryptagglutinoids, yang bertindak balas dalam ujian Coombs tidak langsung dengan serum antihammaglobulin.

Untuk bekerja dengan antibodi yang tidak lengkap, sejumlah kaedah telah dicadangkan, yang dibahagikan kepada tiga kumpulan utama.

1. Kaedah konglomerasi. Telah diperhatikan bahawa antibodi yang tidak lengkap mampu menyebabkan penyatuan sel darah merah dalam protein atau medium makromolekul. Sebagai media seperti itu, gunakan serum AB (tidak mengandungi antibodi), albumin sapi, dextran, biogel - gelatin yang disucikan khas, dibawa ke pH neutral dengan larutan penyangga, dan lain-lain (lihat Konglutinasi).

2. Kaedah enzimatik. Antibodi yang tidak lengkap dapat menggabungkan sel darah merah yang sebelumnya telah dirawat dengan enzim tertentu. Untuk pemprosesan seperti itu, trypsin, ficin, papain, ekstrak dari ragi roti, protelin, bromelin, dan lain-lain digunakan..

3. Uji Coombs dengan serum antiglobulin (lihat reaksi Coombs).

Antibodi yang tidak lengkap yang berkaitan dengan agglutinoid dapat memberikan kesannya pada ketiga-tiga kumpulan kaedah. Antibodi yang berkaitan dengan cryptagglutinoids tidak dapat mengagregat sel darah merah tidak hanya dalam garam, tetapi juga dalam medium makromolekul, dan juga menyekatnya pada yang terakhir. Antibodi ini hanya dijumpai dalam ujian Coombs tidak langsung, dengan bantuan yang bukan sahaja antibodi yang berkaitan dengan cryptagglutinoids ditemui, tetapi juga antibodi yang merupakan agglutinoid.

Antibodi monoklonal

Dari Bahan Tambahan, Jilid 29

Cara klasik menghasilkan antibodi untuk tujuan diagnostik dan penyelidikan adalah dengan mengimunisasi haiwan dengan antigen tertentu dan seterusnya memperoleh sera imun yang mengandungi antibodi dengan kekhususan yang diperlukan. Kaedah ini mempunyai sejumlah kelemahan, yang berkaitan terutamanya dengan fakta bahawa sera imun merangkumi populasi antibodi heterogen dan heterogen yang berbeza dalam aktiviti, pertalian (pertalian untuk antigen) dan kesan biologi. Sera imun konvensional mengandungi campuran antibodi khusus untuk antigen tertentu dan molekul protein yang mencemarkannya. Antibodi monoklonal yang diterima melalui klon sel hibrida - hibridoma mewakili jenis reagen imunologi baru (lihat). Kelebihan antibodi monoklonal yang tidak diragukan adalah standard genetiknya, kebolehulangan tanpa had, kepekaan dan kekhususan yang tinggi. Hibridoma pertama diasingkan pada awal 70-an abad ke-20, namun, perkembangan sebenar teknologi yang berkesan untuk membuat antibodi monoklonal dikaitkan dengan kajian Köhler dan Milypteyn (G. Kohler, S. Milstein), hasilnya diterbitkan pada tahun 1975-1976. Pada dekad berikutnya, arah baru dalam bidang kejuruteraan sel yang berkaitan dengan pengeluaran antibodi monoklonal dikembangkan lebih lanjut..

Hibridoma dibentuk oleh penyatuan limfosit haiwan hiperimunisasi dengan sel yang ditransplantasikan oleh pelbagai jenis asal. Hibridoma mewarisi dari salah satu ibu bapa kemampuan untuk menghasilkan imunoglobulin tertentu, dan dari yang kedua, kemampuan untuk menghasilkan semula tanpa had. Populasi sel hibrid yang diklon dapat menghasilkan imunoglobulin homogen secara genetik dengan kekhususan tertentu untuk jangka masa yang panjang - antibodi monoklonal. Antibodi monoklonal yang paling banyak digunakan dihasilkan oleh hybridoma yang diperoleh menggunakan garis sel tikus unik MORS 21 (RE).

Masalah yang tidak dapat diatasi dari teknologi antibodi monoklonal merangkumi kerumitan dan kerumitan memperoleh klon hibrida yang sangat produktif yang menghasilkan imunoglobulin monospesifik; kesukaran mendapatkan hibridoma menghasilkan antibodi monoklonal kepada antigen lemah yang tidak dapat mendorong pembentukan limfosit B yang terangsang dalam jumlah yang mencukupi; kekurangan sifat tertentu dari sera imun dalam antibodi monoklonal, misalnya, keupayaan untuk membentuk endapan dengan kompleks antibodi dan antigen lain, di mana banyak sistem ujian diagnostik didasarkan; frekuensi peleburan limfosit yang rendah menghasilkan antibodi dengan sel myeloma dan kestabilan terhad hibridoma dalam kultur jisim; kestabilan rendah semasa penyimpanan dan peningkatan kepekaan persediaan antibodi monoklonal terhadap perubahan pH, suhu inkubasi, serta pembekuan, pencairan dan pendedahan kepada faktor kimia; kesukaran mendapatkan hibridoma atau pemindahan transplantasi antibodi monoklonal manusia.

Hampir semua sel dalam populasi hybridoma yang diklon menghasilkan antibodi monoklonal kelas yang sama dan subkelas imunoglobulin. Antibodi monoklonal dapat diubahsuai menggunakan kaedah kejuruteraan imun selular. Oleh itu, adalah mungkin untuk mendapatkan "triomes" dan "quadroms" yang menghasilkan antibodi monoklonal dengan kekhususan yang ditentukan sebelumnya, mengubah pengeluaran IgM sitotoksik pentamerik kepada pengeluaran IgM bukan sitotoksik pentamerik, IgM bukan sitotoksik monomerik atau IgM dengan pertalian yang berkurang, dan juga beralih (sambil mengekalkan kekhususan antigenik) Rembesan IgM ke rembesan IgD, dan rembesan IgG ke rembesan IgG2a, IgG2b atau IgA.

Genom tikus memberikan sintesis lebih dari 1 * 10 7 varian antibodi yang berbeza yang secara khusus berinteraksi dengan epitop (antigenik penentu) protein, karbohidrat atau antigen lipid yang terdapat dalam sel atau mikroorganisma. Pembentukan ribuan antibodi yang berbeza terhadap satu antigen, yang berbeza dalam kekhususan dan pertalian, adalah mungkin; sebagai contoh, imunisasi dengan sel manusia yang homogen menyebabkan hingga 50,000 antibodi yang berbeza. Menggunakan kacukan membolehkan anda memilih hampir semua varian antibodi monoklonal yang dapat disebabkan oleh antigen ini dalam tubuh haiwan eksperimen.

Kepelbagaian antibodi monoklonal yang diperoleh daripada protein (antigen) yang sama memerlukan penentuan kekhususannya yang lebih baik. Pencirian dan pemilihan imunoglobulin dengan sifat yang diperlukan di antara banyak jenis antibodi monoklonal yang berinteraksi dengan antigen yang dikaji sering berubah menjadi kerja eksperimen yang lebih intensif buruh daripada mendapatkan antibodi monoklonal. Kajian-kajian ini merangkumi pemisahan kumpulan antibodi ke dalam kumpulan khusus untuk epitop tertentu, diikuti dengan pemilihan pada setiap kumpulan pilihan terbaik untuk pertalian, kestabilan, dan parameter lain. Untuk menentukan kekhususan epitop, kaedah immunoassay enzim kompetitif paling kerap digunakan..

Dianggarkan bahawa urutan utama 4 asid amino (ukuran epitop biasa) boleh berlaku hingga 15 kali dalam urutan asid amino molekul protein. Walau bagaimanapun, tindak balas silang dengan antibodi monoklonal diperhatikan pada frekuensi yang jauh lebih rendah daripada yang diharapkan dari pengiraan ini. Ini berlaku kerana jauh dari semua laman web ini dinyatakan di permukaan molekul protein dan dikenali oleh antibodi. Sebagai tambahan, antibodi monoklonal mengesan urutan asid amino hanya dalam konformasi tertentu. Perlu diingat bahawa urutan asid amino dalam molekul protein tidak diedarkan secara statistik, dan laman pengikat antibodi jauh lebih besar daripada epitop minimum yang mengandungi 4 asid amino.

Penggunaan antibodi monoklonal telah membuka peluang yang tidak dapat diakses sebelumnya untuk mempelajari mekanisme aktiviti fungsional imunoglobulin. Buat pertama kalinya menggunakan antibodi monoklonal, adalah mungkin untuk mengenal pasti perbezaan antigen dalam protein yang sebelumnya tidak dapat dibezakan secara serologi. Perbezaan subtipe dan ketegangan baru antara virus dan bakteria dibuat, dan antigen selular baru ditemui. Dengan menggunakan antibodi monoklonal, dijumpai ikatan antigen antara struktur, keberadaannya tidak dapat dibuktikan dengan pasti menggunakan sera poliklonal (konvensional imun) Penggunaan antibodi monoklonal memungkinkan untuk mengenal pasti penentu antigenik virus dan bakteria yang konservatif dengan kekhususan kumpulan luas, serta epitop spesifik strain dengan kebolehubahan dan kebolehubahan yang besar..

Yang penting adalah pengesanan penentu antigen menggunakan antibodi monoklonal, yang mendorong penghasilan antibodi pelindung dan peneutralan terhadap agen berjangkit, yang penting untuk pengembangan ubat terapi dan profilaksis. Interaksi antibodi monoklonal dengan epitop yang sesuai boleh menyebabkan halangan sterik (spatial) untuk manifestasi aktiviti fungsional molekul protein, serta perubahan alosterik yang mengubah konformasi bahagian aktif molekul dan menyekat aktiviti biologi protein.

Hanya dengan bantuan antibodi monoklonal adalah mungkin untuk mengkaji mekanisme tindakan koperasi imunoglobulin, saling berpotensi atau saling menghambat antibodi yang ditujukan kepada pelbagai epitop protein yang sama.

Untuk penghasilan sejumlah besar antibodi monoklonal, tumor tikus asites lebih kerap digunakan. Persediaan murni antibodi monoklonal dapat diperoleh pada media bebas serum dalam kultur suspensi yang dapat ditapai atau dalam sistem dialisis, dalam kultur mikroenkapsulasi dan alat seperti kultur kapilari. Untuk mendapatkan 1 g antibodi monoklonal, diperlukan kira-kira 0,5 l cecair ascitic atau 30 l cairan kultur yang diinkubasi dalam fermenter dengan sel hibridoma tertentu. Dalam keadaan pengeluaran, sejumlah besar antibodi monoklonal dihasilkan. Kos yang signifikan untuk pengeluaran antibodi monoklonal dibenarkan oleh kecekapan tinggi pemurnian protein pada antibodi monoklonal yang tidak bergerak, dan pekali pemurnian protein dalam prosedur kromatografi afiniti satu tahap mencapai beberapa ribu. Kromatografi afinitas berasaskan antibodi monoklonal digunakan untuk membersihkan hormon pertumbuhan, insulin, interferon, interleukin yang dihasilkan oleh strain bakteria, ragi, atau sel eukariotik yang diubah suai dengan kaedah kejuruteraan genetik.

Penggunaan antibodi monoklonal sebagai sebahagian daripada kit diagnostik berkembang pesat. Menjelang tahun 1984, kira-kira 60 sistem ujian diagnostik yang disediakan menggunakan antibodi monoklonal disyorkan untuk ujian klinikal di Amerika Syarikat. Tempat utama di antaranya diduduki oleh sistem ujian untuk diagnosis awal kehamilan, penentuan tahap hormon darah, vitamin, ubat-ubatan, diagnostik makmal penyakit berjangkit lain.

Kriteria pemilihan antibodi monoklonal untuk penggunaannya sebagai reagen diagnostik dirumuskan. Ini termasuk pertalian tinggi untuk antigen, yang memastikan pengikatan pada kepekatan antigen yang rendah, serta persaingan yang berkesan dengan antibodi organisma tuan rumah yang telah terikat dengan antigen dalam sampel ujian; orientasi terhadap laman antigen, biasanya tidak dikenali oleh antibodi organisma tuan rumah dan oleh itu tidak disamarkan oleh antibodi ini; orientasi terhadap penentu antigenik berulang dari struktur permukaan antigen yang didiagnosis; polyvalency memberikan aktiviti IgM yang lebih tinggi berbanding IgG.

Antibodi monoklonal dapat digunakan sebagai ubat diagnostik untuk penentuan hormon dan ubat, sebatian toksik, penanda tumor malignan, untuk klasifikasi dan pengiraan leukosit, penentuan gabungan kumpulan darah yang lebih tepat dan cepat, untuk mengesan antigen virus, bakteria, protozoa, untuk diagnosis penyakit autoimun, pengesanan autoantibodi, faktor reumatoid, penentuan kelas imunoglobulin dalam serum darah.

Antibodi monoklonal memungkinkan untuk berjaya membezakan struktur permukaan limfosit dan dengan ketepatan yang besar untuk mengenal pasti subpoyulasi utama limfosit dan mengklasifikasikannya kepada keluarga leukemia manusia dan sel limfoma. Reagen antibodi monoklonal baru memudahkan penentuan limfosit B dan T-limfosit, subkelompok T-limfosit, mengubahnya menjadi salah satu langkah mudah untuk mengira formula darah. Dengan bantuan antibodi monoklonal, satu atau lain-lain subpopulasi limfosit dapat dikeluarkan secara selektif, mematikan fungsi sistem imuniti selular yang sesuai.

Kaedah sedang dikembangkan untuk mengesan tumor dan metastasisnya di seluruh organisma dengan memperkenalkan isotop radioaktif yang diberi label dengan antibodi monoklonal khusus untuk antigen tumor. Keupayaan antibodi monoklonal yang dilabelkan dengan isotop radioaktif untuk mencari penentu antigenik yang unik membolehkan ukuran dan penyetempatan infarksi miokard ditentukan. Pendekatan ini dapat digunakan untuk mendiagnosis luka lain, termasuk asal berjangkit (termasuk proses parasit dan bakteria).

Biasanya, sediaan diagnostik berasaskan antibodi monoklonal mengandungi imunoglobulin yang dilabel dengan iodin radioaktif, peroksidase, atau enzim lain yang digunakan dalam reaksi imunoassay enzim, serta fluorokrom, seperti isotiosianat fluorescein, yang digunakan dalam kaedah imunofluoresensi. Kekhususan tinggi antibodi monoklonal sangat bernilai ketika membuat produk diagnostik yang lebih baik, meningkatkan kepekaan dan kekhususan radioimunmassay, enzim immunoassay, kaedah imunofluoresensi analisis serologi, menaip antigen.

Penggunaan terapi antibodi monoklonal boleh berkesan sekiranya perlu untuk meneutralkan racun dari pelbagai asal, dan juga racun antigenaktif, untuk mencapai imunosupresi semasa pemindahan organ, untuk mendorong sitolisis sel tumor yang bergantung kepada pelengkap, untuk membetulkan komposisi T-limfosit dan imunoregulasi, untuk meneutralkan bakteria yang tahan terhadap antibiotik, imunisasi pasif terhadap virus patogen.

Halangan utama penggunaan terapi antibodi monoklonal adalah kemungkinan perkembangan tindak balas imunologi buruk yang berkaitan dengan asal-usul heterologi imunoglobulin monoklonal. Untuk mengatasinya, perlu mendapatkan antibodi monoklonal manusia. Kajian yang berjaya ke arah ini memungkinkan penggunaan antibodi monoklonal sebagai vektor untuk penyampaian ubat-ubatan yang terikat secara kovalen yang disasarkan.

Ubat terapeutik dikembangkan yang khusus untuk sel dan tisu yang ditentukan dengan ketat dan mempunyai sitotoksisiti yang disasarkan. Ini dicapai dengan konjugasi protein yang sangat toksik, seperti toksin difteria, dengan antibodi monoklonal yang mengenali sel sasaran. Diarahkan oleh antibodi monoklonal, agen kemoterapi mampu secara selektif memusnahkan sel-sel tumor di dalam tubuh yang membawa antigen tertentu. Antibodi monoklonal juga dapat bertindak sebagai vektor ketika dimasukkan ke dalam struktur permukaan liposom, yang memastikan penghantaran sejumlah besar ubat yang terkandung dalam liposom ke organ atau sel sasaran.

Penggunaan antibodi monoklonal secara konsisten bukan sahaja akan meningkatkan kandungan maklumat reaksi serologi biasa, tetapi juga mempersiapkan kemunculan pendekatan baru yang mendasar untuk kajian interaksi antigen dan antibodi.